生姜总姜酚和总黄酮的制备及对pc12细胞拟脑缺血模型的保护作用研究

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1、河南大学硕士学位论文生姜总姜酚和总黄酮的制备及对PC12细胞拟脑缺血模型的保护作用研究姓名：韩春雷申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：王军20100501摘要目的：提取分离生姜总姜酚、总黄酮，并对其进行含量测定以及PCI2细胞的损伤抑制研究，为生姜抗脑缺血有效部位的深入研究奠定基础。方法：1．采用75％乙醇，按1：3(m：v)比例对生姜中的主要成分进行提取。提取物以甲醇溶解除杂，浓缩甲醇溶出物得浸膏。以聚酰胺为柱层析材料，以不同浓度乙醇一水溶液为洗脱剂，对生姜浸膏进行分离。采用硅胶G板，以石油醚一乙酸乙酯(7：3)为展开剂，5％盐酸酸性三氯化铁乙醇溶

2、液和三氯化铝乙醇溶液为显色剂进行薄层(TLC)检测，50％乙醇洗脱部分为姜酚类化合物，减压蒸干得总姜酚干膏；95％乙醇洗脱部分减压蒸干得总黄酮干膏，并用紫外分光光度法对生姜总黄酮进行含量测定。以石油醚．乙酸乙酯(7：3)为洗脱剂，以硅胶为柱层析填料对总姜酚进行粗分；以6．姜酚、8．姜酚为对照品，分别吸取洗脱液5．109l，点于硅胶G薄层板上，以石油醚．乙酸乙酯(7：3)、氯仿．甲醇(9：O．5)为展开剂，5％盐酸酸性三氯化铁乙醇溶液显色；根据TLC检测结果合并洗脱液，浓缩蒸干。采用制备型高效液相(Prep．HPLC)，色谱条件：C180DBⅢ10啪色谱柱

3、(30mm×150mm)；流量15ml／min；检测波长：280nm、370nm；进样量3-5ml；流动相：甲醇．水(65：35)，对总黄酮进行分离纯化得到单体化合物。2．采用H202造成PCI2细胞损伤模型，通过倒置显微镜观察细胞的形态，M丌法测定了解PCI2细胞损伤情况和存活率，研究6一姜酚、8一姜酚、总姜酚、总黄酮和对照品的细胞保护作用；结果：1．共提取生姜27．06kg，得生姜75％乙醇提取物干膏0．8kg，提取率为2．96％。取5009生姜75％乙醇提取物，分离得到总姜酚126．Og，得率为25．2％。从总姜酚分离出6一姜酚，8-姜酚两个单体化

4、合物。以芦丁为对照品，测得生姜总黄酮提取物中黄酮类化合物含量为12．86％，加样回收实验RSD值为1．86％。分离得生姜黄酮I(929．5mg)，化合物2(40．6rag)。以生姜黄酮I为对照品，以高效液相色谱法测得生姜总黄酮中黄酮I的含量为0．79％。2．与损伤组比较，6一姜酚1laM、109M；总姜酚109M；总黄酮(O．01—0．5I-tg／L)可明显提高A5700D值，显著提高PCI2细胞生存率(P<0．0501"P<0．01)。8一姜酚的As700D值与损伤组比较无显著差异，无统计学意义。结论：1．以该提取方法提取生姜总姜酚和总黄酮，操作简便。

5、结果准确可靠，为进一步研究生姜中总姜酚和总黄酮的提取工艺提供理论依据。2．6一姜酚1州、10pM，总姜酚10pM和总黄酮(0．0l-0．5pg／L)对H202损伤的PCI2细胞具有明显的保护作用。关键词：生姜；姜酚；总黄酮；脑缺血ⅡAbstractobjective：Toprepareandassaythecontentofgingerolsandflavonoidsingreenrhizomes，andtostudytheprotectiveeffectsoncerebralischemiainratsandtheinhibitioneffectsin

6、theH202inducedischemiainculturedratpheochromocytomacells(PCI2)．Methods：1．111etotalgingerolsingreenrhizomeswereextractedby75％ethan01．EtOH-H20wasusedastheeluenttopreparegingerolsbypolyamidecolumn．Todetectthe50％and95％ethanoldissolutionsrespectivelyinTLC、析thpetroleumether-ethylacetat

7、e(7：3)嬲developingagent，埘m1％aluminumchloridesolutionand5％ferrictrichloride器chromogenicreagent．Thenrecycledtheethanolpartsrespectivelytogetthetotalgingerolsandtotalfiavonoids，andthenassaythegingerflavonoidsbyUVspectrophotometry．Petroleumether-ethylacetate(7：3)wasusedaStheeluenttois

8、olatethemonomeficcompoundsingingerolsbyc