中国被毛孢固体和液体培养中生长特性的研究

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1、兰州交通大学硕士学位论文摘要本文综述了冬虫夏草和中国被毛孢的生物学特性及其研究进展，其中重点概述了冬虫夏草菌无性型的确证、中国被毛孢形态学和生长特性、以及菌体活性物质的提取和检测，之后在此基础之上展开实验和研究。实验以中国被毛孢为研究对象，经过培养基优化实验后，分别在固体和液体条件下培养中国被毛孢无性型，通过测定：1)中国被毛孢液体培养条件下，菌体生物量、多糖、甘露醇、蛋白质等有效药用成分含量以及过氧化氢酶、几丁质酶、脲酶、蛋白酶等相关酶活力的动态变化。2)中国被毛孢固体培养条件下，菌体形态学相关特性(包括菌丝、分生孢子的特征和形成机制)和菌体生物量、菌体多糖、甘露

2、醇含量的动态变化。取得以下研究结果：1．通过碳源、氮源、添加物的单因子实验以及L934多因子正交试验，优化中国被毛孢培养基成分和配比，结果表明：中国被毛孢生长最佳碳源、氮源、添加物分别为：葡萄糖、水解乳蛋白和酵母粉、鲜牛奶，其最佳配比依次为2％：O．5％：0．1％：20％。2．液体培养中，通过检测茵体生物量、采用葸酮．硫酸法检测菌体多糖含量、高碘酸钠比色法检测菌体甘露醇含量、考马斯亮蓝法检测菌体蛋白质含量，结果表明：菌体生物量在第16d达到最大，最高得率为2．74mg／mL，菌体多糖、甘露醇、蛋白质含量与菌体生物量成正相关，其最大含量分别为4．73％、3．54％、2

3、0．99％。不同温度条件下，18。C菌体生物量和菌体多糖含量要高于同时间段的其他温度条件，而甘露醇则是20。C培养条件下含量更高。3．液体培养条件下，采用高锰酸钾滴定法检测过氧化氢酶活力、N．乙酰葡萄糖胺比色法检测几丁质酶活性、靛酚蓝比色法检测脲酶活性、茚三酮比色法检测蛋白酶活性，结果表明：过氧化氢酶和蛋白酶的活性随着培养时间的增加而逐渐提高；脲酶活性在第4．8d逐渐提高，8d活性达到最高，之后出现下降；几丁质酶在第8d．20d酶活力逐渐提高。4．固体培养条件下，通过光学显微镜记录观察菌体结构、特征和生长方式、菌体无性孢子(分生孢子)的形成机制、血球计数版统计分生孢

4、子数量变化，结果表明：中国被毛孢菌丝主要是以出芽生长的方式繁殖，分生孢子主要是由分生孢子囊纵裂形成对生分生孢子的方式形成。分生孢子在培养到第20d时能明显的检测到，其数量在第30d达到最大，不同的温度条件对分生孢子形成时间没有影响，但是对分生孢子的数量有影响，以14℃条件下分生孢子数量更高。中国被毛孢固体和液体培养中生长特

5、生的研究5．固体培养条件下，菌体生物量、多糖、甘露醇的含量随着培养时间的增长逐渐增高，培养前期(0．20d)，其差异不明显，随着物质的积累，差异逐渐明显。不同温度条件下，以18"C培养条件，菌体生物量、多糖和甘露醇含量要高于同时问段其他培养条件，

6、变温条件(14．18。C／12h)对菌体生长的促进效果没有恒温条件(18℃)高。通过以上实验，所取得的结果能够为冬虫夏草替代品．液体发酵菌丝的工业化生产提供理论依据和参考，同时为冬虫夏草提供菌体接种、生长、繁殖、保藏以及最终实现冬虫夏草的全人工培养提供实验基础。关键词：冬虫夏草；中国被毛孢；形态特性；生长特性研究类型：基础研究兰州交通大学硕士学位论文AbstractThearticlereviewedthebiologicalcharacteristicsofOphiocordycepssinensisandHirsutellasinens西，andtheirres

7、earchprogress．ThekeypointwassummarizedtheasexualconclusiveevidenceofOphiocordycepssinensis，morphologyandgrowthcharacteristicsofHirsutellasinensis，theextractionanddeterminationofactivematerialinhypha，thenbegintheexperimentandresearchonthisbasis．Hirsutellasinensisastheresearchobjectofthe

8、experiment，aftertheculturemediumoptimizationexperiment，cultivatedinsolidandliquidconditionsrespectively，bydetermine：1)Undertheliquidculture，thecontentofhyphabiomass，polysaccharide，mannitol，proteinandothervalidmedicalcompositionandthedynamicchangesofthecatalase，chitinase，urease，protea