通用探针实时荧光pcr检测禽病毒病方法的研究

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2、应遵守此规定。论文作者签名：黼导师签名：日期：2聪‘、提山东农业大学硕十专业学位论文缩写PCRR，r．PCRRTF．PCRDNARNAEBIPTGLBAmpTaqX—Gal中英文缩略表英文PolymerasechainreactionReverstranscriptionPCRReal．timeflurescentPCRDeoxvribonucIeicacidRibonucluncacidEthidiumbromideIsopropylthio·-B-D-galactosideLuria—Bertanimediu

3、mAmpicillinThermusaquaticu5-Bromo一4·Chloro一3一Indolyl—B—D—GalactosideM-MLVReverseTranscriptaseRnasinRibonucleaseInhibitormol／literInfectiousbronchitisvirusinfectiouslaryngotracheitisNewcastlediseasevirusHemagglutinationinhibitionDeoxyadenosinetriphosphateDeoxy

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5、凝集反应血细胞凝集抑制反应脱氧腺苷三磷酸脱氧尿苷三磷酸脱氧胞苷三磷酸脱氧鸟苷三磷酸脱氧胸腺苷三磷酸每个反应管内的荧光信号达到设定阂值时所经历的循环数每分钟转数～一M州M一姒m一一一一一口通用探针实时荧光PCR检测禽病毒病方法的研究basepairsgrammxcrogram13．anometerplcrogramunitlitermicroliterVO儿Ⅱnemilliliter2碱基对兑微克纳克皮克单位升微升体积毫升坤g峙岵船uL此v毗山东农业火学硕上专业学位论文通用探针实时荧光PCR检测禽病毒病方法的研究摘

6、要禽病毒性疾病是威胁养禽业最严重的一类传染病，由于病毒对抗生素的不敏感性，在临床治疗上很难达到有效目的，因此免疫预防便成为预防和治疗的这一类疾病有效手段，疫情监督也就成为此措施的必要环节。尽早的发现病毒，并对该病毒的流行状况作出预测是预防病毒病的关键，但近年来由于病毒性疾病多表现为亚临床症状，常规检测方法很难快速对其作出确诊，故现代化生产需要建立一种快速、准确、高效的检测方法。实时荧光PCR技术是一种新型的核酸检测技术，它从病毒的基因组着手对病毒进行检测，在临床诊断中已经用于细菌、病毒及遗传性疾病的检测，具有极大

7、的应用价值。本研究根据荧光PCR检测原理，利用通用探针建立了禽病毒性疾病实时荧光PCR检测方法。这一个研究方法不但摒弃了SYBRGreenI类荧光染料假阳性率高的弊端，而且具有快速、准确、高效的特性。本研究共分为三部分：第一部分：新城疫病毒的分离和鉴定为了研究我国近年来病毒性疾病的流行情况，拟对本实验所涉及病毒做出分离和鉴定，但是由于时间有限，故只做了新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)的分离和鉴定工作。本部分采用鸡胚尿囊腔培养，血凝(Hemagglutination，HA)和血凝抑制

8、(Hema991utinationinhibition，HI)，间接荧光抗体试验(IFA)，RT～PCRJPCR试验和基因芯片试验对NDV进行了分离和鉴定。从全国七个省市的9个鸡场53只疑似患有新城疫病的鸡中，分离到28株NDV野毒株，结果说明NDV在我国普遍存在，而且呈现蔓延的趋势；同时试验结果说明基因芯片方法要优于其他三种检测方法，具有高度的特异性和灵敏度。第二部分：