大熊猫基因组dna文库构建

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1、浙江大学硕士学位论文大熊猫基因组DNA文库的构建摘要基因组文库是指含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体，它是进行分子克隆和基因组结构和功能研究的基础。其中细菌人工染色体(BAC)文库因其转化效率高、嵌合体少、插入片段易回收以及容载量较大等优点而被广泛应用。本项研究以大熊猫的成纤维细胞以及肝组织细胞为材料，以pBeloBACll为载体，构建大熊猫的基因组细菌人工染色体DNA文库。该文库包含了39264个克隆，分别保存于409块96孔细胞培养板中。经过黥100个随机抽样的克隆分析表明，插入片段的平均大小为[60kb，因此约相当于大熊猫基因组的2倍，即2个库容量

2、。酶切10个克隆证明，经100代繁殖其插入片段仍稳定不变。关键词：大熊猫细菌人工染色体基因组文库浙江大学硕士学位论文ConstructionofaGiantPanda(Ailuropodame]anoJeuc8)DNAgenomiclibraryABSTRACTGenomiclibraryistherecombinantDNAclonescontainingentirerandomfragmentsofacertainorganism．Itisessentialtogenomestructureandfunctionreseach．Thereinto，bacteriala

3、rtificialchromosome(BAC)libraryisthemostwidelyusedoneatpresentduetoitshighertransformationefficiency；lowerchimerismlevel，easierinsertfragmentsisolationandlargercapability．ThelibraryisconstructedbyusingfibrocyteandlivercellsfromGiantPanda(Ailuropodamelanoleuca)andpBeloBAC1vector．Itconsists

4、of39264clones，whichhavebeenarrayedin40996-wellmieroriterplates．TheaverageinsertsizeintheBACvectoriscalculatedtobe160kbbasedontheexaminationof100randomlyselectedclones，indicatingthatthelibrarycontainednearly2-fordcoverageofGiantPandagenome．Restrictanalysisof10BACclonesshowthattheseinsertsa

5、restableevenreproducedforatleast100cellgenerations．KeyWords：GiantPandabacterialartificialchromosome(BAC)genomielibrary4浙江大学硕士学位论文基因组文库构建及其在保护遗传学中的应用前景基因工程技术的迅速发展，使人类对生物体基因的结构、功能、表达及其调控的研究深入到分子水。而对特定基因片段的分离和获得，则是上述研究的基础。完整的基因组文库的构建，使任何DNA片段的筛选和获得均成为可能。因此，基因组文库是进行分子克隆和基因组结构与功能研究的基础。基因组文库是指含

6、有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体。这个文库象是一个贮存有基因组全部序列的信息库，故称为基因组文库(genomiclibrary)⋯，又称之人工构建的基因“活期储蓄所”(genebank)[2】。1．基因组文库的产生和发展1．1克隆载体的发展作为遗传学研究的重要内容，基因组文库的概念早在70年代就已提出(Clarke等，1976)【3】，1978年Maniatis等设计了哺乳动物基因组的大量随机片段方案[4]。克隆载体作为基因组文库构建中的重要媒介，提高其容纳量一直是重要发展方向之一。自1973年Cohen[5]构建了第一个质粒载体pSl01以来，越来越多

7、的克隆载体相继涌现，使得克隆载体的整体结构和克隆效率有了很大改善。大致经历了三个发展阶段[“：第一代是以^噬菌体和粘粒为代表的载体，第二代的代表为YAC(yeastartificialchromosome)、BAC(bacterialartificialchromosome)及PAC(P1--derivedartificialchromosome)等人工染色体载体，以及目前正在开发中的MAC(mammalianartificialchromosome)及HAC(humanartificialchromosome)载体系统。这类