p21活化蛋白激酶2抑制化疗药物诱导的人乳腺癌细胞凋亡的机制研究

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1、ByXiangLi一Supervisor：Prof．ZimingDongPathologyandPathophysiologyBasicMedicalCollegeMay2012--．—————————～原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：彳事啁日期：·劢t工年6月侣日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的

2、职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑卅I大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：磊尹司日期：z。，2年6月f8日I--．．．．．．．．．——————．．．．．．．．．．—一摘要P21活化蛋白激酶2抑制化疗药物诱导的人乳腺癌

3、细胞凋亡的机制研究博士研究生李翔导师董子明郑州大学基础医学院病理生理教研室中国郑州450001乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占女性全身各种肿瘤的10．4％，并且在全世界肿瘤的发生中排列第五。目前乳腺癌的治疗方法主要有：手术，放疗，化疗以及内分泌治疗。手术治疗仍为乳腺癌的主要治疗手段之一，但是基于乳腺癌在确诊时已是一种全身性疾病，全身化疗的目的就是根除机体内残余的肿瘤细胞以提高外科手术的治愈率，而在乳腺癌患者化疗过程中所面临的困难之一就是对化疗药物的耐药问题。越来越多的研究表明，对化疗药物耐药的乳腺癌患者，其体内某些生长因子受体的表达高于对化疗

4、药物敏感的患者，例如：人表皮生长因子二型受体，胰岛素样生长因子I型受体等。这些生长因子受体的上调往往会引起其下游分子的激活或过表达，例如，Akt，细胞外信号调节激酶(ERKs)，p38以及p21活化的蛋白激酶l，提示了这些生长因子受体以及其下游分子的表达与修饰也许与乳腺癌患者对化疗药物耐药有关，但是具体机制尚有待进一步探讨。P21活化蛋白激酶(P21activatedproteinkinases，Paks)家族是～类丝氨酸苏氨酸蛋白激酶，它们最早是作为RhoGTP酶Cdc42和Racl的特异性结合物而被发现的，后来证明Paks家族在细胞的一些生理过程，例如，细胞迁

5、徙，细胞生长，细胞分裂，细胞凋亡以及内分泌激素信号通路中起着重要的作用。到目前为止，在哺乳类动物细胞中，已经有6个Pak家族成员被确定，Pakl．3属于I类Pak家族，Pak4．6则被归为II类Pak家族。其中，Pakl被认为与细胞生长有关。研究表明，Pakl通过磷酸化Bad在丝氨酸112位点和丝氨酸136位点摘要从而促进细胞的生长，Pakl也可以通过磷酸化雌激素受体的丝氨酸305位点，引起细胞周期调节蛋白D1的表达，进而使乳腺癌细胞对于雌激素的依赖性减弱。有趣的是，同属于I类Pak家族成员的Pak2，与Pakl有着总体76％的序列同源性以及催化亚基96％的序列同

6、源性，却有着与Pakl不同的功能。实验表明，Pak2既可以促进细胞生长，也可以引起细胞凋亡。Pak2可以被磷酸肌醇3激酶和Akt活化，进而促进细胞的生长。然而，当外界刺激来临，例如，UV的辐射或者化疗药物的出现，Pak2就会被Caspase．3切割并活化，产生一个活性片段，Pak2p34，这个片段进而从细胞浆转移到细胞核中，引起细胞凋亡的发生。最近发现，Caspase．8和．10也有类似切割并活化Pak2的功能。我们之前的实验结果显示，Pak2可以磷酸化coJun的五个苏氨酸位点(苏氨酸2，8，89，93和286)，从而促进表皮生长因子(EGF)诱导的细胞生长和转

7、化。JerryW．Marlin等人报导，Pak2可以通过抑制Caspase．3的活性以及自身的被切割，从而使Pak2活性较低的乳腺癌细胞Hs578T相比较Pak2表达较高的MCF-7和MDA-MB．468细胞，对于化疗药物诱导的细胞凋亡更加敏感，这就提示我们Pak2在抑制化疗药物引起的肿瘤细胞凋亡的过程中起着一定的作用，然而，具体的作用机制却有待于进一步的讨论。本研究采用人乳腺导管癌组织芯片以及不同种类的人乳腺癌细胞，研究Pak2在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中的表达；通过研究Pak2对Caspase07的修饰作用，Pak2对Caspase．7功能的影响以及下调Pak2

8、的表达对化