γδt细胞在幽门螺杆菌感染中的作用特点及机制研究

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1、第三军医大学博士学位论文γδT细胞在幽门螺杆菌感染中的作用特点及机制研究姓名：刘涛申请学位级别：博士专业：临床检验诊断学指导教师：邹全明2012-05第三军医大学博士学位论文Y6T细胞在幽门螺杆菌感染中的作用特点及机制研究摘要幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hpylori)是一种微需氧、螺旋状革兰阴性杆菌，主要感染定植于人体胃粘膜。流行病学调查显示，全球50％以上人口都曾感染过Hpylori，其感染可导致慢性胃炎，继而引起消化性溃疡和粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤(MALT)，甚至与胃腺癌的发生发展密切相关，己被WHO列为I类致癌因子。

2、尽管Hpylori感染能够引发宿主较强烈的固有免疫和获得性免疫应答，但自然感染Hpylori后机体的免疫反应并不能有效清除细菌，反而由于慢性持续性感染导致胃粘膜免疫病理损害。目前，Hpylori慢性持续性感染机制及相关的免疫调控机制并不完全清楚。T淋巴细胞免疫在Hpylori感染所致疾病的发展进程具有重要的作用。根据TCR双肽链构成的不同，可将T细胞分为apT细胞和丫6T细胞两类。O【pT细胞作为重要的效应细胞在获得性免疫应答中发挥主要作用，而1，6T细胞由于其分布特点和抗原识别特性，在机体的固有性免疫中发挥着独特的作用。1，6T细胞主要分布于肠道

3、、呼吸道皮肤及泌尿生殖道的黏膜和皮下组织，而脾脏和淋巴结中分布较少，外周血中Y6T细胞仅占T淋巴细胞的2％～5％。粘膜组织是病原微生物入侵机体的第一道屏障，机体T细胞总库存的一半都在粘膜组织内。因此，1，6T细胞这一分布特点提示其在细菌，病毒，真菌和原虫等病原体感染的黏膜免疫防御中都扮演着重要的角色。∞T细胞在胃肠道粘膜大量存在，而胃粘膜正是Hpylori感染定植的主要部位，是细菌入侵的第一道免疫防线。因此，Y6T细胞与Hpylori感染的关系日益受到重视，其免疫应答状况极可能决定了Hpylori的感染定植及相关疾病的转归。已有研究报道，Hpylo

4、ri感染患者外周血中的Y6T细胞明显增高，并且与胃炎严重程度密切相关，清除细菌后，丫6T细胞数量亦相应减少。然而，丫6T细胞在Hpylori感染中的应答规律；对细菌感染定植的具体作用；对Hpylori感染诱导的免疫应答的调节机制等，目前还不清楚。明确这些问题将有助于我们对Hpylori感染过程中免疫应答网络的全面理解和阐述，为采取正确的免疫调控方式逆转其慢性持续化进程提供新的线索。【研究目的】1．本研究以Y6T细胞为主要研究对象，探讨其在Hpylori感染过程中的应答规律第三军医大学博士学位论文及特点。2．分析Y6T细胞对Hpylori定植量和炎症

5、程度的影响。明确其在Hpylori感染中的作用。3．探讨俩T细胞影响Hpylori感染定植的免疫调节机制4．初步分析H．pylori感染患者外周血Y6T细胞特点【研究方法】1．H．pylori感染过程中1，6T细胞的应答特征建立Hpylori感染C57BL／6小鼠模型，在Hpylori感染后不同时问点处死小鼠，分离小鼠的脾，Peyer’S结，肠系膜淋巴结及小肠上皮间淋巴细胞，采用流式细胞技术，分析Y6T细胞的应答规律及表型特征。细胞内因子染色，检测丫6T细胞分泌细胞因子谱。同时，利用IL一23p190敲除小鼠研究IL一23对IL一17+丫6T细胞的

6、调节作用。2．1，6T细胞在Hpylori感染中的作用研究Hpylori感染野生型小鼠及Y6T细胞基因敲除小鼠，采用real—timePCR检测Hpylori定植量的变化，H&E染色检测胃组织炎症程度。随后，体外扩增分选感染小鼠脾脏中的Y6T细胞。在Hpylori感染前24小时，通过静脉过继免疫TCR．6l小鼠，检测其对细菌定植量及胃组织炎症的影响。3．Y6T细胞在Hpylori感染中的作用机制探讨Hpylori感染野生型小鼠及丫6T细胞基因敲除小鼠，采用流式细胞技术，分析丫6T细胞缺失后机体Th细胞免疫应答变化；抽提感染胃组织RNA，real—t

7、imePCR检测细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶(MMPs)变化，ELISA检测感染小鼠血清及胃粘膜局部IgG和IgA抗体水平。4．Hpylori感染患者外周血中Y6T细胞分析收集新桥医院消化内科Hpylori阳性(25例)和Hpylori阴性(18例)胃炎患者的外周血标本。采用流式细胞技术，分析Y6T细胞比例变化及细胞亚群应答情况。【研究结果】1．1，6T细胞在H．pylori感染过程中的应答特征1．1感染Hpylori后，小鼠系统及局部免疫系统中丫6T细胞应答明显增强，小鼠脾及肠系膜淋巴结中的Y6T细胞的比例在感染Hpylori24h后即开始

8、明显升高(P<0．05)，48h达到高峰。而PP结及肠上皮间淋巴细胞中丫6T细胞于感染后24h即达到峰值，并且在感染早期(