丹参对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响

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1、湖北中医药大学硕士学位论文丹参对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响姓名：张秀萍申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：张燕燕20120516摘要目的随着基础研究的深入，人们认识到血管平滑肌细胞(vascularsmoothmuselecell，VSMC)成为心血管疾病药物治疗作用的靶细胞之一。局部血管损伤后产生过量的活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)，对刺激VSMC增殖起重要作用⋯，故有效阻断ROS对VSMC的增殖与凋亡的作用是防治动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的重要措施之一。

2、因此，以VSMC为细胞模型筛选出有效抑制其生长增殖而毒副作用较低的药物并研究其作用机理，是近年来医学研究的难点和热点之一。丹参的有效成分主要为丹参的水溶性物质，具有抑制血小板粘附、聚集、释放、增加血清cAMP水平，抑制TXA2形成，促进PGl2生成，清除氧自由基，抗脂质过氧化等作用乜1。本课题利用细胞培养技术观察丹参对过氧化氢(H：O：)等活性氧(ROS)诱导的大鼠VSMC增殖、凋亡的影响，为对抗H：O：介导的脂质过氧化损伤的保护作用提供实验依据。方法取180-2009的Wistar大鼠(华中科技大学同济医学院动物实验中心提供)

3、胸主动脉中膜用组织块贴壁法以及酶消化法培养VSMC，在倒置相差显微镜下观察VSMC特征性的“峰竹和“谷"状生长，取3—5代培养细胞经抗a-SM肌动蛋白单抗鉴定阳性细胞率达85％以上者用于实验。培养液中加入过氧化氢(H：O：)诱导大鼠VSMC的增殖，通过实验确定促VSMC增殖作用最显著的H20：浓度为实验浓度。注射用丹参(冻干)，通过实验确定最低实验浓度以及最佳作用时间。最后通过建立H：0：刺激主动脉血管平滑肌细胞增殖的体外模型，丹参作为影响平滑肌细胞增殖因素，用MTT㈣、免疫组织化学D3圳等方法，来测定并分析平滑肌细胞增殖的情况

4、，并且通过测量bel-2和bax蛋白表达量来进一步分析平滑肌细胞的增殖与凋亡之间的相关性。实验分组：1)正常对照组：常规培养的VSMC；2)H：0：刺激对照组；3)H：O：+丹参低剂量组组；4)H：O：+丹参中剂量组；5)H：0：+丹参高剂量组组。进行VSMC增殖与凋亡实验，观察分析丹参对活性氧(H20：)诱导培养的大鼠VSMC增殖周期时相的影响以及凋亡的影响。结果1取V／istar大鼠胸主动脉血管平滑肌经过原代和传代培养成功后，用3—5代处在生长对数期的细胞进行抗0【一SM肌动蛋白单抗鉴定，85％以上为阳性，则可以用于实验。2

5、H20：浓度在0．02-180HM范围内对VSMC具有促进增殖的作用，其中当H20：浓度为30pM时，其增殖作用最显著；当浓度超过225uM以后，与阴性对照比较，P

6、趋于稳定；丹参持续作用36小时后，对VSMC的抑制率达到51．5％，之后对VSMC的抑制作用趋于稳定状态。4与正常对照组比较，H20：刺激对照组的bcl-2表达量明显增加(P

7、管平滑肌细胞增殖作用，促进血管平滑肌细胞的凋亡。3．丹参抑制血管平滑肌细胞增殖及促进其凋亡作用，其机制可能是，丹参抑制bcl-2基因及表达，促进bax基因及表达，降低Bcl-2／Bax比值，从而使细胞增殖和凋亡达到一种正态的平衡。关键词丹参；过氧化氢；血管平滑肌细胞；增殖；凋亡HTheeffectofSaIViamiItiorrhizaonproIiferationandapoptosiSofthevascuIarsmoothmuseIeceISSpeciaIty：CIinioaILaboratoryDiagnostics．Au

8、thor：ZhangXiupingTutor：Prof．ZhangYanyanAbstractObjectiveAlongwiththedevelopmentofbasiCresearch，peopletea1izethatthevascularsmoothmu