扁吻鱼微卫星分子标记的筛选、群体分析及东北雅罗鱼肾组织盐碱差异表达候选基因的筛选

《扁吻鱼微卫星分子标记的筛选、群体分析及东北雅罗鱼肾组织盐碱差异表达候选基因的筛选》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码：10264研究生学号：M090101014上海海洋大学硕士学位论文扁吻鱼微卫星分子标记的筛选、群体分析及东北题目：雅罗鱼肾组织盐碱差异表达候选基因的筛选IsolationofMicrosatellitefromGenomeofAspiorhynchuslaticepsDay、GeneticDiversityoftheWildPopulationofAspiorhynchus英文题目：laticepsDay；ScreeningofAlkali-acclimationdifferentialexpressioncandidategenesinthegillandkidneyofLe

2、uciscusWaleckiiDybowski专业：水产养殖研究方向：分子遗传育种姓名：郝卓然指导教师：梁利群二O一二年五月十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关

3、部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文扁吻鱼微卫星分子标记的筛选、群体分析及东北雅罗鱼肾组织盐碱差异表达候选基因的筛选摘要通过磁珠富集法筛选扁吻鱼（AspiorhynchuslaticepsDay）的微卫星分子标记。采用限制性内切

4、酶Sau3AI对扁吻鱼基因组DNA进行酶切，选取250～750bp的片段进行PCR全基因组扩增，并利用生物素标记的（CA）8探针进行微卫星片段的富集。将得到的片段连接T载体后转入DH5α大肠杆菌中，采用菌落PCR法筛选阳性克隆，最后挑取扩增片段大小在250～750bp之间的192个克隆菌落送生物公司测序。测序结果显示，含微卫星序列的克隆有53个。经统计，在这53个微卫星位点中完美型共36个,占67.92%;非完美型12个,占22.64%;混合型5个,占9.43%。选取侧翼序列符合引物设计条件的微卫星序列50个，结果成功设计微卫星引物25对。引物筛选发现，24对引物可扩增出清晰条带，其中1

5、3对引物具有多态性。结果显示等位基因数在2～6，多态信息含量为0.2237～0.7445，PIC平均值为0.5353，12个(92%)位点表现出高度的多态性(PIC>0.5)，1个(8%)位点表现出中度多态(0.25＜PIC＜0.5)。观测杂合度（Ho)和期望杂合度（He)的平均值分别为0.5567和0.6893。同时随机抽取1000对鲤鱼引物检测扁吻鱼同源位点的多态性，获得具多态性位点18对。采用微卫星分子标记的方法，利用31个微卫星分子标记对扁吻鱼及塔里木裂腹鱼的野生群体进行遗传多样性分析，以期对其种质资源进行有目的保护，为遗传育种等提供理论依据。共检测了扁吻鱼1个野生群体，24个个

6、体，塔里木裂腹鱼1个野生群体，19个个体，2个群体的平均等位基因数A为7.78～11.65，平均有效等位基因数为Ne为4.91～6.81，平均观察杂合度Ho为0.6043～0.7077，平均期望杂合度He为0.7618～0.8313，平均多态信息含量PIC为0.7174～0.7970。实验结果显示，扁吻鱼与尖嘴臀鳞鱼群体之间遗传相似系数I=0.6211（遗传距离DS=0.4763），平均遗传分化系数为0.1564，表明2个群体间存在明显的遗传分化，与分类学研究一致，属于同科不同属的种群。为从基因表达水平上研究鱼类耐盐碱机制，选取东北地区具有耐盐碱性状的东北雅罗鱼(Leuciscuswal

7、eckiiDybowski)为实验材料，采用相对实时荧光定量I上海海洋大学硕士学位论文PCR法进行基因表达量差异检测。鉴于在碱度发生变化的过程中，鳃、肾是参与渗透压调节的重要组织，其中的基因表达变化通常是最快、最灵敏的。通过查阅文献，根据梁利群等对雅罗鱼与斑马鱼芯片比对的结果，查阅动、植物耐盐碱相关的文献，挑选了11个与离子转运相关的膜通道蛋白基因，共设计引物17对。根据荧光定量RT-PCR的扩增特点和要求，所设计引物的扩增片段大小