两种经济贝类和刺参微卫星-着丝粒作图及遗传图谱的整合

《两种经济贝类和刺参微卫星-着丝粒作图及遗传图谱的整合》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国海洋大学博士学位论文两种经济贝类和刺参微卫星--着丝粒作图及遗传图谱的整合姓名：聂鸿涛申请学位级别：博士专业：水产养殖指导教师：李琪20120602两种经济贝类和刺参微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合两种经济贝类和剌参微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合摘要我国是海水养殖大国，海洋贝类的养殖在我国海水养殖业中占有非常重要的地位。栉孔扇贝(Chlamysfarreri)和皱纹盘鲍(Haliotisdiscushannai)是具有较高经济价值的两种重要海洋贝类。近几年来，我们在国际合作和基金项目的支持下，对栉孔扇贝和皱纹盘鲍等海洋贝类的雌核发育进行了系统研究，探明了雌

2、核发育机理以及雌核发育二倍体诱导的细胞学机制，确立了皱纹盘鲍和栉孔扇贝雌核发育二倍体诱导的有效程序，查清了雌核发育二倍体的生长和存活特点。本研究以这两种贝类为研究材料，开发了栉孔扇贝和皱纹盘鲍的多重PCR扩增体系，用大量的微卫星和AFLP等分子标记研究了这两种贝类雌核发育二倍体的遗传学特性，查清了贝类雌核发育的近交程度，利用雌核发育二倍体家系和两个微卫星连锁图谱上的大部分标记及新筛选标记的半四分体分析，构建了这两种贝类较高密度微卫星一着丝粒图谱，并与遗传图谱进行整合，定位了个连锁群中着丝粒的位置。此外，我们还分析了重要的海水养殖种类刺参的雌核发育二倍体遗传学特性，完成了

3、刺参遗传连锁图谱部分连锁群着丝粒的定位。主要研究结果如下：1．栉孔扇贝微卫星标记多重PCR的开发通过单个微卫星位点的PCR扩增，6％聚丙酰胺变性凝胶电泳检测微卫星的特异性扩增条带，查清各个微卫星位点的最佳PCR扩增条件。挑选引物序列间互不干扰、扩增片段长度不重叠、退火温度接近的2．3个位点进行多元PCR组合的筛选。本实验开发了4组栉孔扇贝高多态性微卫星多重PCR扩增体系，提高了基因分型效率。利用CERVUS3．0软件对12个栉孔扇贝全同胞家系360个子代进行家系鉴定，验证了这4组微卫星多重PCR家系鉴定效率。结果表明，144个基因型数据中4．9％的微卫星位点出现偏分离，

4、无效等位基因出现的频率为14．8％，平均多态信息含量为O．872。家系鉴定分析显示，一组微卫星多重PCR鉴定成功率为75％，两组鉴定成功率达到100％。两种经济贝类和刺参微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合2．栉孑L扇贝雌核发育二倍体遗传学特性研究通过紫外线照射精子并用细胞松弛素B(CB)抑制减数分裂第二极体释放诱导了3个栉孔扇贝雌核发育二倍体家系，研究了27个微卫星位点在3个雌核发育家系中的分离，进行了微卫星一着丝点重组率分析，通过杂合后代的比例计算出重组率Y的范围是0．05到O．78，平均值为0．41，发现在栉孔扇贝的某些染色体上存在交叉干涉现象。假设完全干涉的条件

5、下，计算出微卫星．着丝点距离范围是3cM．39cM。估算出栉孔扇贝雌核发育子一代的近交系数为O．59。在3个对照组家系中这27个位点全部符合孟德尔遗传规律，其中9个位点存在无效等位基因。而在3个雌核发育组中，在CF01，CF02，CFl7和CFMSP009这4个位点发现两类纯合予的比例偏离1：l。分析的所有雌核发育后代都只有母本的等位基因，没有发现父本特异等位基因，说明本实验用的雌核发育子代100％为雌核发育个体。3．栉子L扇贝微卫星标记一着丝粒作图及与遗传图谱的整合着丝粒作图是进一步完善连锁图谱，研究染色体的交叉以及查明减数分裂过程中交叉干涉情况的重要工具。从已发表的

6、栉孔扇贝遗传连锁图谱所有19个连锁群中挑选了137个微卫星标记，利用对照组筛选出90个母本杂合的微卫星标记，研究了这90个微卫星在3个雌核发育二倍体家系中的分离，每个家系60个雌核发育子代，通过半四分体分析，完成了19个连锁群的微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合。对照组分析结果显示，90个微卫星位点全部符合孟德尔遗传，而雌核发育组中有4．4％的标记偏离两类纯合子1：1分离比。第二次分裂分离比Y值范围是0．033至0．778，平均值是0．332，证实了栉孔扇贝某些染色体中存在交叉干涉现象。发现在至少两个家系有分离的42个标记中有1个在不同家系间有差异，表明个别位点在不同

7、家系间的基因一着丝粒重组率有所差异。着丝粒定位结果基本符合栉孔扇贝染色体核型，但在连锁图谱和着丝粒图谱中发现一些位点顺序有所不同。本研究使栉孔扇贝遗传连锁图谱上的信息更加完善，可作为基因组研究富有信息的工具，并为将来扇贝着丝粒结构和功能的研究奠定基础。II两种经济贝类和刺参微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合4．皱纹盘鲍微卫星标记多重PCR的开发通过对单个微卫星位点的PCR扩增，6％聚丙酰胺变性凝胶电泳检测微卫星的特异性扩增条带，查清了各个微卫星位点的最佳PCR扩增条件。对筛选出的具有清晰扩增产物，特异性好的位点进行位点的组合扩增，通过优