密花石斛多糖ddp-1-d的分离纯化及结构表征

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文密花石斛多糖DDP．1．D的分离纯化及结构表征IsolationandStructuralCharacterizationofaPolvsaccharideDDP．1．DfromtheStemsofDendrobiumDensiflorum课题来源：国家科技重大专项课题基金(2009ZX09103．009)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员药物化学李强谢扬教授雷林生教授鄢明教授刘永宏教授陈文华教授陈金香副教授论文评阅人陈卫民教授林敬明2012年5月8日广州硕士学位论文密花石斛多糖DDP．1．D的分

2、离纯化及结构表征衣仳硕士研究生：李强指导教师：谢扬教授摘要石斛是常用名贵中药材，《神农本草经》更将其列为上品。我国有石斛属(Dendrobium)植物76种以上，其中作为药用的40多种。石斛具有滋阴清热、生津益胃、明目利嗓等功能，用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热等多种病症。现代药理表明，石斛具有治疗白内障、胃肠功能紊乱和降血糖等作用，临床应用广泛。它的有效成分主要是多糖和生物碱，其中多糖由于具有抗氧化、增强免疫力和抗肿瘤作用而成为研究热点。目前石斛大多来源于金钗石斛、铁皮石斛、细茎石斛及迭鞘石斛等，由于这些药用石斛的资源比较紧张，处于供不应求状况，这

3、对石斛多糖的深入开发研究不利。密花石斛(Dendrobiumdensiflorum)在我国的广东、海南、广西等地分布较广，产量相对较高，目前已成为药用石斛的主要代用品之一，被《贵州省中药材标准》(1988版)和《江苏省中药材标准》(1998版)收载。本课题选用密花石斛为原料，采用正交设计试验优选密花石斛水溶性多糖的提取工艺。在此基础上，通过DEAE．52纤维素柱和凝胶柱色谱对总多糖进行纯化，获取密花石斛均一多糖，研究密花石斛均一多糖的理化性质及相对分子质量、单糖组成等一级结构表征，为进一步探讨密花石斛多糖的药理作用机理奠定物质基础，也可为密花石斛多糖

4、在药品领域的开发利用提供科学依据。一．正交设计优选密花石斛多糖提取工艺研究摘要以提取密花石斛多糖含量为评价指标，采用正交设计试验L9(34)，选择温度、加水量(倍)、提取次数及提取时间(h)为考察因素，对影响密花石斛多糖提取工艺的因素进行了研究。干燥的密花石斛茎粉末依次用丙酮、甲醇索式提取脱脂。取脱脂密花石斛干燥粉末，按正交设计方案提取，水提醇沉，用Sevag试剂去蛋白。水溶液部分透析，冷冻干燥，获得密花石斛粗多糖，准确称重。按照苯酚．硫酸法检测多糖的含量。各因素对密花石斛多糖提取工艺的影响作用程度分别为加热温度>提取次数>提取时间>加水倍数。因此确

5、定密花石斛多糖较佳提取工艺为90℃、加水20倍、提取3次、每次2h。考虑到能耗与后处理简便起见，最适宜的密花石斛多糖提取工艺条件调整为90℃、加水10倍、提取3次、每次2h。验证试验，结果显示该方法具有良好的重现性(RSD=0．027)。在此工艺条件下多糖提取得率3．15％。二．密花石斛多糖的提取分离纯化及UV、FTIR分析脱脂密花石斛干燥粉末加10倍量水于干燥的密花石斛残留物中90℃提取3次，每次2h。抽滤，滤液合并减压浓缩，加4倍量95％乙醇4"C静置过夜，3000rpm离心5min后，沉淀重复水溶醇沉2次。沉淀用去离子水复溶，用Sevag试剂去

6、蛋白4次，水溶液部分装入透析袋(截留分子量：3500Da)在去离子水中透析48h，透析袋内溶液经10000rpm离心10min，上清液冷冻干燥，获得密花石斛粗多糖DDP，DDP通过DEAE．52纤维素离子交换柱NaCl阶段洗脱分离得中性糖DDP．1以及5个酸性糖DDP．2、3、4、5、6。中性糖组分DDP．1过SephacrylS-200柱分级纯化后，得DDP．1．A，DDP．1．B，DDP．1一C，DDP．1．D和DDP．1．E。DDP—1．C、DDP．1．D及DDP—1．E的水溶液，经UV-Vis分光光谱仪扫描，波长范围为200—800nlll，

7、DDP．1．C、DDP．1．D和DDP．1．E在260hill处没有吸收峰，说明不含核酸成分；在280IIITI处，曲线基本上平滑，表明3个多糖组分基本不含蛋白质。密花多糖样品DDP．1．C、DDP．1．D和DDP．1．E分别经FT-IR光谱仪扫描，扫描范围为4000"-'400cm-1。位于3500,、-3300cm"1的特征峰是糖分子O—H的伸缩振动，3000---2800cml的一组峰是糖分子C．H的伸缩振动，1200一．-1000cml处的吸收峰为C．O．C环内醚中的C．O伸缩振动和C．O．H的O．H变角振动。II硕士学位论文3个多糖组分都具

8、有这三组峰，确证为多糖化合物。另外，在1653-一1639cm-1处为水的振动吸收峰；938cm"1处吸收峰