多糖的分离纯化及性质表征ppt课件

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1、多糖的分离纯化及结构表征员工培训2012-7-311、多糖的基本概述多糖，又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过苷键连接而成的链状聚合物。(C6H10O5)n，n>101、多糖的基本概述组成分类同多糖：由一种单糖组成（淀粉、半纤维素、几丁质等）杂多糖：由两种或两种以上单糖组成（透明质酸、硫酸软骨素、硫酸皮肤素等）1、多糖的基本概述单糖组成类型单糖五碳糖D-木糖，L-阿拉伯糖六碳糖D-葡萄糖，D-甘露糖，D-半乳糖，L-半乳糖，D-果糖己糖胺N-乙酰葡萄糖胺，N-乙酰半乳糖胺糖醛酸D-葡萄糖酸，D-半乳糖酸，D-甘露糖酸去氧己糖L-鼠李糖，L-岩藻糖，6-去氧-塔罗糖

2、1、多糖的基本概述多糖的表征无还原性。大多难溶于水，溶于水后形成胶体溶液。有旋光性，但没有变旋现象。无甜味。在酸或酶的作用下水解成单糖和寡糖。分子量在数万到数百万之间1、多糖的基本概述多糖广泛分布于自然界高等植物、微生物（细菌和真菌）、地衣、海藻和动物体内。1、多糖的基本概述愈来愈多的研究发现,人的生命过程几乎都与糖链有关:细胞间通讯、识别和相互作用细胞的运动和粘附病原与宿主细胞的作用糖链携带着生物信息.它在细胞表面的分子识别过程中起着决定性作用.大量研究证明许多多糖具有免疫调节、降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗病毒和保护胃肠系统等多种生物活性2多糖的提

3、取分离多糖存在形式：细胞壁外-胞外多糖细胞壁内-胞内多糖（大多数多糖）细胞壁多糖动植物的细胞大多由脂质包围，用机械粉碎后还必须脱脂（沙氏提取器，乙醇回流）。对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇处理。2多糖的提取分离原料前处理提取过滤或离心醇沉脱蛋白脱色透析沉淀滤渣滤液柱层析多糖2.1材料的预处理根据不同原料性质，对一些样品进行粉碎处理，含脂高应先脱脂，含色素高需进行脱色，通常采用丙酮、乙醚、乙醇进行预处理以达到脱脂或脱色的目的。对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇处理。2.2多糖的提取方法热水浸提法大多数多糖在热水中溶解度较大且性质稳定。得

4、率应考虑提取时间、提取次数、溶剂体积、浸提温度、pH值、醇析浓度和植物颗粒大小等。水提醇沉是多糖提取最常用方法。多糖为非极性大分子化合物，大多采用不同温度的水、稀碱溶液或氯化钠水溶液做提取溶剂。2.2多糖的提取方法稀酸提取法1%醋酸酸性条件引起多糖中糖苷键的断裂，尽量避免在酸性条件提取多糖。提取时间宜短、提取温度低。2.2多糖的提取方法稀碱提取法0.1-1M氢氧化钠（钾），如几丁质提取用5%氢氧化钠去杂质。碱提多糖时易发生美拉德反应，可通过前处理去除小分子糖、避免pH值处在8-10范围、避免提取温度在60-80℃。通氮气或加入硼氢化钠（钾）2.2多糖的提取方法微波

5、辅助提取法利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中。2.2多糖的提取方法超声辅助法提取法利用超声波的空化作用产生的压力造成被破碎物质在瞬间破碎，加速效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取。与常规提取方法相比，具有提取时间短、产率高、无需加热等优点。常用于辅助提取细胞内物质。2.2多糖的提取方法酶法酶解反应较温和将组织分解，增加多糖

6、的溶出，可较大幅度提高产率。常用于除去各种与多糖结合的结合蛋白质。2.3多糖提取液浓缩多糖提取液浓缩应尽量在低温下进行，并防止提取物与氧气接触，防止多糖被氧化，保持原有结构及生物活性。吸附法干葡聚糖凝胶加入提取液中，两者比例为1:5.由于凝胶吸水，提取液的体积可缩小三倍左右，多糖回收率达80%。2.3多糖提取液浓缩超滤法在一定压力下，小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的薄膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到部分的纯化。2.3多糖提取液浓缩透析法把装有提取液的透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇或甘油中，提取液中水分通过透析袋到吸水剂中，从而达到浓缩效果

7、。真空浓缩通过真空泵抽真空，使水的沸点降低而从提取液中蒸发出来，而多糖成分不受破坏。2.3多糖的沉淀沉淀法是分离生物活性物质的传统方法，在生物活性物质提取中常用于初步分离。有机溶剂沉淀法在提取液中加入与水互溶的有机溶剂，使系统介电常数减小，多糖溶解度减小而发生沉淀。常用的有机溶剂有乙醇、甲醇、丙酮等。2.5脱蛋白粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质，必须分别除去。多糖的分离纯化主要包括脱蛋白、脱色、脱盐和除去小分子杂质2.5脱蛋白采用醇沉或其它溶剂沉淀所获得的多糖，常混有较多的蛋白质，脱去蛋白质的方法有多种：如选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的酚、三氯甲烷

8、、鞣质等试