急性白血病儿童γ-谷氨酰水解酶基因多态性研究

《急性白血病儿童γ-谷氨酰水解酶基因多态性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、遵义医学院硕士学位论文急性白血病儿童γ--谷氨酰水解酶基因多态性研究姓名：张洪洪申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：岳丽杰201205遵义医学院硕十学位论文急‘r+白血{山儿童Y·谷氨龇水解酶基洲多态性研究中文摘要急性白血病儿童丫．谷氨酰水解酶基因多态性研究目的：Y。谷氨酰水解酶(GGH)是甲氨蝶呤(MTX)聚谷氨酸化的一种关键酶，是一种溶酶体酶，通过裂解MTX多聚谷氨酸盐(MTXPGs)的谷氨酸残基使MTX重新流出细胞，从而使MTX在细胞内的作用减弱，高水平的GGH与MTX的耐药有关。本实验通过研究GGH基

2、因全编码区单核苷酸多态性(cSNPs)存急性白血病(AL)患儿和正常儿童中的分布情况，并以期发现新的多态性位点，分析各基因型在两组之问的分布差异。方法：从92例AL患儿的骨髓和124例正常儿童的外周血中提取总RNA，逆转录制各eDNA。采用RT—PCR一变性梯度凝胶电泳(RT-PCR—DGGE)结合DNA直接测序技术对以上eDNA标本进行G础基因cSNPs及基因突变的筛查与鉴定。结果：首次在中国汉族儿童中鉴定了GGH基因4个国外已筛查到的cSNPs，即T16C(Cys6Arg)、G91A(Ala31Thr)、A2

3、68G(1ie90Val)和C452T(Thrl51lie)，并确定了AL患儿和正常儿童中GGH各cSNP位点的等位基因频率和基因型分布特征。在AL组及正常儿童组中，GGH452位点T等位基因频率分别为8．7％和10．1％，16位点C等位基因频率分别为20％和17．1％，91位点A等位基因频率分别为20％和16．7％，268位点G等位基因频率分别为1．1％和O．8％。这些cSNPs在两组人群的等位基因频率及基因型频率的差异无统计学意义，表明这些多态性与白血病的易感性无相关性。此外发现中国汉族儿童与日本、非裔．美洲

4、及墨西哥人群的GGH452位点T等位基因频率差异均具有统计学意义(P<0．05)。并发现两个新的错义突变：在正常对照组中发现GGH的第2外显子191位点存在T_G碱基替代，导致第64位氨基酸由亮氨酸(Leu)被色氨酸(Trp)替代；在白血病患儿中发现GGH基因第8外显子779位点存在A_G碱基替代，即第260位氨基酸由组氨酸(His)变为精氨酸(mrg)，产生另一新的错义突变杂合子。结论：在中国汉族人群中利用PCR．DGGE结合DNA直接测序技术对GGH基因进行大规模eSNPs筛查，发现4个国外已报道到的cSNP

5、s，即T16C(Cys6Arg)、G91Al遵义医学院硕十学位论文急’H．F1血炳儿童Y-谷氨酰水解酶基l火l多念性研究(Ala3lThr)、A268G(Ile90Val)、C452T(Thrl51Ile)，并初步确定了中国AL患儿和正常儿童中GGH各SNP位点的等位基因频率和基因型分布特征；存国内用统计学方法证实不同种族人群GGHC452T的等位基因频率存在明显差异，说明GGHC452T基因多态性存在种族差异性，提示MTX药效存种族间也可能存存较大差别：在GGH中发现2个新的错义突变，即T191G(Leu64T

6、rp)和A779G(His60Arg)，为国际首次报道。关键词：Y．谷氨酰水解酶基因；单核苷酸多态性；变性梯度凝胶电泳；急性白血病2遵义医学院硕十学位论文急性白血舾儿童7-谷氮酰水解酶基洲多念性研究AbstractAnalysisofsinglenucleotidepolymorphisminy-glutamylhydrolasegeneinchildrenwithacuteleukemiaObjective：’／-Glutamylhydrolase(GGH)playsanimportantroleonthein

7、tracellularpolyglutamation，andisalysosomalpeptidasethatcatalysestheremovalof1'-linkedpolyglutamates，convertinglong·chainmethotrexatepolyglutamate(MTXPG)intoshort—chainMTXPGandultimatelytomethotrexate(MTX)，allowingMTXtObeexportedfromthecells．HighlevelsofGGHhav

8、ebeenassociatedwithcellularresistancetOMTX．ThisstudyistoinvestigatetheallelicfrequenciesandgenotypedistributioncharactersofGGHcodingregionsinglenucleotidepolymorphisms(cSNPs)inChineseHart