牛筋草issr反应体系优化与我国部分地区牛筋草遗传多样性分析

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1、山东农业大学硕士学位论文牛筋草ISSR反应体系优化与我国部分地区牛筋草遗传多样性分析姓名：张杨申请学位级别：硕士专业：农药学指导教师：王金信20120615山东农业大学硕士学位论文摘要牛筋草(Eleusineindica①．)Gaerth)为一年生禾本科穆属(Eleusine)植物，是我国农田重要的恶性杂草，具有顽强的生命力和繁殖力。本文应用微卫星方法对我国北京、河南、安徽、山东、浙江和广东六省市的18个牛筋草居群进行遗传多样性分析，对牛筋草适应能力以及分布发展潜力进行初探。本研究结果如下：一、利用L16(45)正交试验设计和单因素优化试验两种方法，获得牛筋

2、草ISSR-PCR的最适反应体系为：模板DNA80ng，Mg”1．75mmol／L，dNTP0．4mmol／L，引物0．3pmol／L，TaqDNA聚合酶1U，10xPCRBuffer2．51xL，最后用dda20补足至25此。ISSR-PCR的扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，退火30s，72℃延伸lmin，35循环；72℃延伸10min。二、利用从30对引物中筛选出的14对多态性高、重复性好的ISSR引物，在18个居群中，扩增得到158条带，DNA片段大小分布在150～2000bp之间，其中多态性条带146，多态性百分率为92．41％，

3、每条引物扩增位点数为5～17条不等，平均每对引物扩增14．6个位点。三、利用NTSYSpc2．10e生物软件对18个供试牛筋草居群进行分析。Jaccaxd遗传相似系数(GS)数分布在0．3125-4)．8750之间，遗传相似度最大为0．8750，分别为HS和ST，即来自河南商丘和山东泰安两地的牛筋草居群，显示出两地牛筋草基因交流频繁，遗传多样性水平较高。四、UPGMA聚类分析结果表明，在eoeiiicient=-0．546处，将其分为三个遗传类群，18个牛筋草居群分为3类，其中第一类为包括广东和浙江两省的牛筋草居群；第二类包括北京、河南和山东三省的牛筋草居群

4、：第三类包括山东、河南和安徽三省的牛筋草居群。遗传距离与其分布的地理距离大体上具有一致性，尽管经历了除草剂的持续多代选择，仍然保持了较高的遗传多样性。。关键词：牛筋草分子标记ISSR遗传多样性我国部分地区牛筋草ISSR反应体系优化与遗传多样性分析AbstractGoosegrass(EIeusineindica(L-)Craerth)isallannualglassweed,withastrongvitalityandfecundity．Itisregarded觞oneoftheworstweeds．Inthisstudy,inter-simpleseque

5、ncerepeat(ISSR)methodwasappliedtodetectgeneticvariationofEleusineindicafrom6provinces，andgeneticstructurebetweenandwithintheeighteenpopulations，tostudytheeighteenpopulationstorevealgeneticdiversityofEleusineindica．111eISSRmolecularmarkerresultswereasfollows：1．Theorthogonalandone—fa

6、ctorexperimentaldesignwereappliedtooptimizeISSRamplificationsystematfourlevelsoffivefaetors(M92+，Taqpolymerase，斛TP，primerandDNAtemplate)respectively．AoptimalreactionsystemWasestablished,251_LLreactionsystemcontainedDNA80ng，MgX+1．75mmol／L，dNTP0．4mmol／L，primer0．31unol／L，Taqpolymcrase

7、1Uand10xPCRBuffer2．51xL．Amplificationprogramincludedpreodenaturationat94"Cfor5min,denaturationat94℃for30s，annealingtemperatureforlmin,after35cycles，theproductwasextendedat72℃for10minandkeptat4"C．2．14polymorphicprimersscreenedfrom30ISSRprimerswereappliedtostudythegeneticdiversityof1

8、8Eleusineindicapopulations