白三烯d4激活bv2小胶质细胞的作用

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1、浙江大学硕士学位论文白三烯D4激活BV2小胶质细胞的作用姓名：骆红云申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：卢韵碧20120220浙江大学颂．L学位论文摘要白三烯D4激活BV2小胶质细胞的作用浙江大学医学院2009级硕士研究生导师摘要药理学骆江云卢韵碧副教授研究背景：半胱氨酰白三烯(cysteinylleul(otrienes，CysLrs，包括LTC4、LTD4和u甩4)是5．脂氧酶一花生四烯酸代谢途径来源的一类重要炎症介质．CysLTs通过激活半胱氨酰白三烯受体(cysteinylleukotrienes眦eptor’CysLT受体，包括两种主要亚型CysLTI和

2、CysLT2受体)参与调节体内诸多病理生理过程，如脑缺血、脑外伤等．以往研究发现：在整体脑缺血损伤过程中，脑内半胱氨酰白三烯含量增高，半胱氨酰白三烯受体可介导缺血后神经元损伤；给予小鼠皮层注射白三烯D4，可诱导神经元损伤．然而，离体细胞实验结果显示，白三烯D4不能直接诱导原代培养神经元损伤．据以上整体与离体的实验结果的不一致，我们推测：白三烯D4诱导神经元损伤的作用，可能是间接通过脑内的其他类型细胞，如脑内参与炎症调节的主要细胞小胶质细胞介导．小胶质细胞在脑损伤，脑内炎症时迅速激活，对于脑缺血后炎症进程有重要影响．然而，cysLTS是否参与激活小胶质细胞及其激活小胶质

3、细胞的机制，尚待阐明．研究目的：观察白三烯D4激活小鼠BV2小胶质细胞的作用，并初步探讨白三烯D4激活BV2细胞的作用机制．1I浙江人学硕f：学位论文摘要研究方法：1．以KLH偶联的CysLTl受体多肽(小鼠)免疫家兔制备兔抗小鼠CysLTI受体多克隆抗体，用ELISA法测定抗体效价，以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性；2．以RT．PCR、W色stemblotting检测BV2细胞半胱氨酰白三烯受体CysLTI和CysLT2mI州A和蛋白的表达；以细胞免疫染色法观察CysLT卜CysLT2的亚细胞定位；3．BV2细胞以不同浓度(O-100l州)白三烯D4(L1’D4)

4、作用24h，光镜下观察小胶质细胞形态变化；以CCK法检测细胞活性变化以反映细胞增殖；以荧光微珠示踪法检测BV2细胞吞噬变化．4．以cys【，Tl受体选择性拮抗剂Montelul(aSt(1．1000nM)，cys【，T2受体选择性拮抗剂HAMI3379(10—10000nM)和Cysu’I／CysL疋受体双重拮抗剂BAYu9773(1．1000nM)在预处理30分钟后再给予LTD4作用24h(期间拮抗剂全程给药)，以荧光微珠追踪法检测细胞吞噬变化，以RT．PCR法检测细胞炎症因子TNF．a、IL．1p和IL．6的mRNA表达水平变化。研究结果：1．成功制备了兔抗小鼠C

5、ysLTl受体多克隆抗体，ELISA测定显示，制备的家兔抗小鼠CysLTl受体抗体的效价大于l／32728，对CysLTI受体的特异性强，对CysLT2受体和GPRl7基本无交叉反应；2．BV2细胞在ml酬A和蛋白水平表达CysLTl、CysLT2；免疫染色显示CysLT卜CysLT2受体主要表达在胞膜；3．嘶作用24h，BV2细胞形态变化不明显，BV2细胞活性无明显变化．4．L1rD4(100nM)作用24h，能显著提高BV2细胞的吞噬能力、上调IL．6的mRNA表达，但不诱导TNF．仅、IL．1D的表达上调；5．CysLTl受体选择性拮抗荆Montelul(aSt

6、(100nM)，CysLT2选择性拮抗剂HAMl3379(100，1000和lOOoOnM)以及CysL，Tl／CysLl’2受体双重拮抗剂BAYu9773(100nM)预给药30min后，再给予LTD4lOOnM作用24h，能进一步增强吞噬；BAYu9773(1州)能拮抗LTD4诱导的吞噬；¨l塑望盔堂堡圭堂丝论文．摘要6．CysLTl受体选择性拮抗剂MontelukaSt(1nM)，CysLTI／CysLl．2受体双重拮抗剂BAYu9773(1nM和10洲)处理可减弱LTD4loO州诱导的IL一6mRNA表达上调，而不同浓度的CysLT2选择性拮抗剂蝴13379对

7、此没有影响．结论：u’D4可激活小鼠BV2小胶质细胞，表现为细胞吞噬能力增强和炎症细胞因子IL一6表达上调；L1D4诱导IL-6表达上调由CysLTI受体介导，而L11D4增强Bv2细胞吞噬的机制需进一步研究确定．关键词：白三烯D4；小胶质细胞；半胱氨酰白三烯受体；吞噬；Monteluk缀：HAMI3379；BAYu9773：IL．6Ⅳ浙江人学硕l：学位论文英文摘要EffectsofLeukotrieneD4onActiVationofBV2MicrogIialCellsZhejiangUniVersitySchoolofMedicineCandid