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1、盐酸左氧氟沙星注射液细菌内毒素检测方法探究【摘要】目的探讨用凝胶法检查盐酸左氧氟沙星注射液中的细菌内毒素。方法参照2010版《中国药典》细菌内毒素检查法，用不同厂家的鲨试剂对不同批号的注射用盐酸左氧氟沙星注射液分别进行干扰实验，探讨考察注射用盐酸左氧氟沙星注射液的细菌内毒素检查方法。结果注射用盐酸左氧氟沙星注射液以消除对鲨试剂的干扰，用灵敏度0.25EU/ML的鲨试剂检测内毒素是有效的，与家兔法检测结果应一致。结论初步认为注射用盐酸左氧氟沙星注射液可以用细菌内毒素法取代家兔法的热原检验【关键词】盐酸左氧氟沙星注射液；细菌内毒素检查法；干扰实验；鲨试剂1仪器恒温水浴
2、锅，型号S648,上海医疗器械七厂；净化工作台，型号HS-1300,苏净集团安泰公司；漩涡混旋器，型号XW-80A,上海沪西分析仪器厂有限公司；微量取液器（50u1-250u1,上海金林生化试剂仪器厂）；无热原吸咀（250U1,湛江博康海洋生物有限公司）；试验所用玻璃仪器均经250°C干烤2h。2试剂与样品2.1试剂鲨试剂(TAL),批号：11082712,灵敏度0.25EU/ml；批号：11032212,灵敏度0.25EU/mlo细菌内毒素工作标准品(CSE),批号：150601-201070,每支140EU。细菌内毒检查用水(BET水),批号：1111070c
3、2.2样品盐酸左氧氟沙星注射液，规格：100ml：0.2g；批号：13052239、13052240.13052241o3方法与结果3.1鲨试剂灵敏度复核［1］用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品溶解，置旋涡混旋器上混合15min,然后制备成0.5、0.25、0.125、0.0625EU/ml的溶液，依据2010版《中国药典》二部附录XIE方法进行灵敏度复核实验,见表1O表1结果表明，测得灵敏度入c均为0.25EU/ml,均在标示灵敏度入的0.5-2.0倍之间，则各批鲨试剂灵敏度符合规定，可以用于细菌内毒素检查。3.2细菌内毒素限值(L)的确定［2］注射用盐
4、酸左氧氟沙星注射液临床使用剂量为一次规格100ml：0.2g,静脉滴注至少60分钟，则细菌内毒素限值(L)按公式L=K/M计算，式中K=5EU/kg•h、M=200mg/60kg•h,计算结果L=l.5EU/mgo根据以有的国家标准及就严不就松的原则，确定每lmg盐酸左氧氟沙星注射液中内毒素的限值为0.6EU。3.3最大有效稀释倍数(MVD)根据已有的国家标准，规定每lmg盐酸左氧氟沙星注射液中内毒素的限值为0.6EUo目前市售鲨试剂灵敏度有0.5、0.25.0.125、0.0625、0.03EU/ml五种规格，根据公式MCD二C•L/入计算，式中C=2mg/ml
5、,L=0.6EU/mg,X=0.5-0.03EU/ml,计算结果最大有效稀释倍数(MVD)应为2.4-40倍，又所用鲨试剂灵敏度为0.25EU/ml,所以MVD=4.8。3.4细菌内毒素标准品的稀释(S)用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素标准品稀释成，0.5.0.25、0.125、0.0625、0.03EU/ml系列浓度的内毒素溶液备用，作为Es系列。3.5供试品溶液的稀释用细菌内毒素检查用水将盐酸左氧氟沙星注射液稀释成1(2mg/ml),2(lmg/ml),4(0.5mg/ml)倍系列浓度的溶液备用。3.6供试品的干扰初筛试验用细菌内毒素检查用水将样品配制成1,2
6、,4倍的系列溶液备用，记为SW系列；另在制备一份同样浓度的样品溶液，在制备中加入细菌内毒素，使每一浓度中含2Xc浓度的内毒素，记为SE系列。选用2个批号的灵敏度为0.25EU/ml的鲨试剂分别与SW和SE系列溶液反应，相应得供试品阴性对照(NPC)和供试品阳性对照(PPC)系列，每一稀释浓度平行做2反应管，同时做阴性对照(NC)和阳性对照(PC),见表2。3.7干扰试验将3批供试品用细菌内毒素检查用水稀释成2倍的溶液(l.Omg/ml)作为供试液，分别取供试液和细菌内毒素检查用水分别将细菌内毒素标准品稀释成0.5EU/ml（2入）、0.25EU/ml（入）、0.1
7、25EU/ml（0.5入）、0.0625EU/ml（0.25入）两个系列浓度，分别取0.1ml,加入到2个批号灵敏度为0.25EU/ml用0.lml细菌内毒素检查用水溶解的鲨试剂中，每一浓度操作4支试管，另外，取供试品和细菌内毒素检查用水做2支阴性对照，进行反应（37±1°C）60土加in,见表3。3.8样品细菌内毒素检查取注射用盐酸左氧氟沙星注射液3批，在细菌内毒素限值为0.6EU/mg下，用细菌内毒素检查用水稀释成2倍稀释溶液，每批取鲨试剂8支，每支加入0.1ml的细菌内毒素检查用水溶解，2支分别加入2倍稀释液0.lml（供试品管）；2支分别加入0.1ml用细
8、菌内毒素检
