资源描述：
《阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织tim—3、tim—1表达影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织TIM—3、TIM—1表达影响【摘要】目的：观察阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentaiautoimmuneencephalomyelitis,EAE)Wistar大鼠的发病情况、组织病理变化及脑组织内T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白-3(TIM-3)、T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白-1(TIM-1)表达水平的影响。方法：将30只雌性Wistar大鼠随机分为佐剂组、EAE组、阿托伐他汀组,以豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)诱发制备大鼠EAE模型，并于给予GPSCH当日开始1次/d灌服0.1%PB
2、S溶液1.5ml/只(佐剂组和EAE组)和含阿托伐他汀的0.1%PBS溶液，1次/d,剂量为8mg/(kg-d),连续13d,观察EAE症状并评分，用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Tim-1mRNA、Tim-3mRNA在脑组织中的表达。结果：阿托伐他汀组发病率降低、临床症状减轻，体重下降减少(P〈0.05)；与佐剂组比较，EAE组TIM-3mRNA明显上升(P<0.05),阿托伐他汀组TIM-3mRNA较EAE组明显下降(P<0.05)；与佐剂组比较，EAE组TIM-1mRNA下降(P〈0.05),阿托伐他汀组TIM-1mRNA较EAE组
3、上升(P〈0.05)。结论：EAE大鼠TIM-3上升，TIM-1下降，提示其在EAE发病机制中发挥作用，通过下调TIM-3、上调TIM-1的表达，可能是阿托伐他汀对EAE保护作用机制之一。【关键词】实验性自身免疫性脑脊髓炎；多发性硬化；TIM-3；TIM-1；阿托伐他汀实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)是以中枢神经系统炎性脱髓鞘为特征的疾病，是研究MS的理想动物模型［1］。T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白(TIM)家族是一类具有免疫调节作用的蛋白，可以作为Th细胞的分化标志［
4、2］。TIM-3是TIM家族中的一员，Monney等［3］研究发现，在体内运用TIM-3特异性抗体使EAE小鼠疾病死亡率增加，中枢神经系统炎症病灶增多，增加和激活CDllb+细胞。TIM-1最先被发现与变应性哮喘的发生有关［4］oTIM-1选择性表达于Th2细胞上，在Thl细胞及Thl7细胞上没有表达［5］。目前研究提示，在人体中，TIM-1不仅与过敏性疾病和哮喘有关，在自身免疫性疾病中也起着调节作用，如在类风湿关节炎的产生与TIM-1的外显子4相关，C反应蛋白与类风湿因子的水平与TIM-1基因的启动子多态性相关［6］。在MS缓解期患者脑脊液单核细胞
5、上可检测到TIM-1mRNA的表达，提示TIM-1对MS的恢复具有有益作用,其机制可能与免疫耐受有关［7］。目前各种能够缓解EAE病情的免疫调节药物在MS的治疗作用仍在试验阶段，且存在相关的副作用及潜在的毒性作用［8］。最近发现，他汀类药物除了其调脂作用外，亦存在免疫调节作用使之用于治疗中枢神经系统脱髓鞘疾病，如MS的研究越来越多［9］。他汀类药物运用于MS以及类风湿关节炎等得临床试验也已经得到有前景的结果［10］o他汀类药物的免疫调节作用包括有保护血脑屏障的完整性［11］,抑制中枢神经系统炎症细胞浸润［11］,促进Thl细胞反应向Th2细胞反应偏移
6、等［9］。最近发现除外其免疫调节作用外，他汀类药物对EAE还具有神经保护和促进神经再生的作用［12］o本实验从免疫诱导第1天开始予以阿托伐他汀药物治疗，根据国外文献报道，选择8mg/(kg•d)作用治疗剂量，观察阿托伐他汀对EAE的治疗作用。并通过检测TIM-3及TIM-1mRNA的表达情况检测阿托伐他汀是否通过影响其表达对EAE起治疗作用。1材料与方法1.1实验动物Wistar大鼠30只，6〜8周龄，体重(200±20)g,雌性；豚鼠10只，300〜400g,雌雄不限。购于湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场。在中南大学湘雅二医院动物实验中心分笼
7、饲养，每笼5只。喂食本医院动物实验中心配置的大鼠饲料，饮自来水，保持室温(18±2)°C,相对湿度(50±10)%,人工光照时间12h/d,自动抽风，每日上午更换食、水和垫料1次，饲养观察3d,能正常进食和饮水者纳入实验用鼠。1.2主要试剂阿托伐他汀购自大连辉瑞制药有限公司，卡介苗(BCG)冻干粉购自北京生物制品研究所，医用羊毛脂购自重庆化学试剂厂，罗可沙尔坚牢蓝购自Sigma公司，RT-PCR试剂盒由Fermentas公司生产，EDTA、Tris购自Sigma公司，引物由上海生物工程技术有限公司生产。1.3抗原制备完全福氏佐剂(CFA)的配制：取医
8、用的石蜡油40ml,医用羊毛脂10g,于三角瓶内充分混合,高温灭菌30min,制成不完全福氏佐剂。将失活的卡
