点带石斑鱼精子种质保存分析

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1、点带石斑鱼精了种质保存研究摘要点带石斑鱼(Epinephelusmalabaricus)是我国东南沿海重要的名贵海水养殖经济鱼类。目前对点带石斑鱼的生物学研究及其人工繁育技术已相当成熟，而对该鱼的精子种质保存技术尚未开展研究。本论文对点带石斑鱼的精子活力、超低温冷冻前后的精子超微结构的差异和精子超低温冷冻保存进行了较详细的研究，为点带石斑鱼精子低温冷冻保存和低温精子种质库的建立提供理论依据。通过设置盐度和pH梯度，研究了盐度、pH值对点带石斑鱼精子活力的影响；同时利用电子显微镜技术对点带石斑鱼精子的超微结构进行了

2、观察，比较了超低温冷冻前后精子超微形态结构的差异。研究结果表明：(1)该鱼精子活力的适宜盐度范围为15-35，盐度为15时，精子寿命最长为26mira最适pH值范围为6．5～8．0。(2)正常的点带石斑鱼精子由头部、中段和尾部三部分组成，精子头部呈球圆形或近圆形，直径约1．8岬；中段不明显，可见线粒体；鞭毛细长，约159m，尾部主要结构是轴丝，为典型“9+2”微管结构。(3)超低温冷冻保存后，点带石斑鱼精子的形态结构损伤明显，主要表现为质膜褶皱、破裂，细胞质外漏，线粒体膨胀破损，脱落和鞭毛断裂等特征。通过选用TS

3、．19、TS．2、Hank’S、MPRS、Cortland、O．75％NaCl等作为稀释液及100／旷25％二甲亚砜(DMSO)、甘油(Gly)、甲醇(MeOH)作为抗冻液，对繁殖季节中3个不同时期的点带石斑鱼精液进行超低温冷冻保存研究。研究结果表明：(1)Hank’s溶液为点带石斑鱼精子冷冻保存最适冷冻稀释液；(2)点带石斑鱼精子保存的最适冷冻保护液组合为Hank’s溶液与10％15％DMSO溶液，可以获得60％以上的冻精成活率，而使用不同浓度的MeOH作为抗冻液时，冻精成活率均为O％；(3)以10％25％Gl

4、y作为抗冻液时，冷冻前未加天然海水时均能激活点带石斑鱼精子正常运动，效果与天然海水相似，加入天然海水后精子运动效果急剧下降，精子冷冻保存后也存在同样现象；(4)为保证获得更高的冻精成活率，点带石斑鱼精液冷冻保存样品的最佳获取时期是在亲鱼排精前1天进行为宜。关键词：点带石斑鱼；精子；种质；超微结构；超低温冷冻保存————————————————————————————————————————————————————————～——————————————————————————————————————————————

5、————一点带石斑鱼精子种质保存研究ABSTRACTEpinephelusmalabaricusistheonevaluableeconomicmariculturespeciesinsoutheastcoastofChina．Currently,researchesonthebiologyandartificialpropagationtechnologyofthefishwerequiteproven．Butthegermplasmpreservationofthefishspermatozoaisnotre

6、ported．Thespermatozoamotility,theultrastructureandthevariationbeforeandafterthecryopreservation,themethodofcryopreservationwereinvestigatedinthispaper．Itprovidedthetheoreticalbasisforthespermatozoacryopreservationandtheestablishmemof丘ozenspermpoolinEmalabaric

7、us．TheeffectofsalinityandpHvalueonthespermatozoamotilityofEmalabaricusWasstudiedbythegradientsettingsofthem，respectively．Theultrastructureandthevariationbeforeandafterthecryopreservationwereobservedandcompared．1heresultsareshownbelow：(1)T11eoptimumrangeofsali

8、nityforthespermatozoamotilityis15-35．111emaximumlongevityWas26min，whichappearedatthesalinityof15，andtheoptimumrangeofpHvalueis6．5～8．0．(2)Thetransmissionelectronmicroscope(TEM)resultshowed