以脐带沃顿胶制作新型生物软骨支架并体外初步构建组织工程软骨的研究

《以脐带沃顿胶制作新型生物软骨支架并体外初步构建组织工程软骨的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号VDC博士学位论文密级以脐带沃顿胶制作新型生物软骨支架并体外初步构建组织工程软骨的研究TofabricateanovelbiologicalcartilagescaffoldwithWharton，Sjellyofhumanumbilicalcordandthepreliminaryresearchoftheconstructionoftissueengineeringcartilagewiththescaffold’invitro．作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期砂_厂一Z吴鸿天冯外科学湘雅医院廖前德教授答辩委员会主席中

2、南大学二O一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。储獬：垃作者签名：．厶。：：：苎日期：丝!埤』月丝日{学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文

3、的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。：必勇垡日、，博士学位论文中文摘要摘要由于创伤、肿瘤及退行性变等各种原因导致的关节软骨损伤在临床上常见，然而由于软骨细胞属于终末分化细胞，软骨本身缺乏血管营养等原因导致软骨组织很难自身修复，从而容易导致关节功能障碍乃至骨关节炎的发生。目前临床上修复关节软骨损伤常用的方法如关节腔清理术、关节磨削成形术、软骨下骨钻孔术及微骨折术等均存在一定不足；而自体或异体软骨细胞移植也存在来源受限及不同程

4、度免疫排斥等问题；比较而言，软骨组织工程无疑是最有发展前景的前沿技术。本课题通过研究以人脐带沃顿胶组织脱细胞后制作新型生物软骨支架，对支架成分、理化性能及生物学性能进行检测，并进行支架复合脐带间充质干细胞体外成软骨的研究，根据组织工程的基本原理体外构建组织工程软骨，以期为软骨组织工程的深入研究和发展提供一定的理论依据和实验基础。第一章以人脐带沃顿胶为原材料制作新型生物软骨支架目的研究以人脐带沃顿胶制作新型生物软骨支架的可行性，并进行支架的外形及显微结构的观察，是否附合软骨支架的基本要求，为软骨组织工程支架研究提供实验基础。方法获取分娩后胎儿脐带，分离出脐

5、带沃顿胶组织，采用酶消化法联合物理冻融法脱细胞，再经冷冻干燥成型法制作软骨支架，并行支架脏染色及SEM照片观察。结果经冷冻干燥后得到支架材料为多孔泡沫状圆柱体结构、呈白色较疏松海绵样物质，大体观察支架表面孔隙较多，HE染色及SEM照片可以看到，沃顿胶经过去细胞化冷冻干燥后得到的生物软骨支架，脱细胞完全，其表面呈多孔状纵横交错的网状三维结构。扫描电镜显示支架呈多孔泡沫状，孔隙分布较均匀，材料内空隙相互连通。结论本部分实验通过对人脐带沃顿胶进行脱细胞处理后经冷冻干燥成型术成功制各了三维多孔海绵样支架，去细胞彻底，支架呈三维多孔网状结构，孔隙分布较均匀，材料内

6、空隙相互连通，可作为软骨组织工程的支架载体。关键词脐带沃顿胶，软骨支架，软骨组织工程，脱细胞博士学位论文中文摘要第二章新型生物软骨支架成分分析及一般理化性能的检测目的通过对支架成分的分析及其理化性能的检测，研究支架是否与软骨基质成分相似，是否附合软骨支架的理化性能要求。方法支架成分应用二甲基亚甲兰法进行GAGs定量检测、通过ELISA法对支架的Ⅱ型胶原含量进行定量检测。并测定支架的孔径、孔隙率、密度、溶胀率、降解率等。结果三维多孔海绵样支架GAGs含量为254．14-18．8ug／mg，II型胶原含量为742．84-74．4ug／mg。支架孔径为105．

7、24．12．8urn；孔隙率为90．3士1．2％；支架密度为0．0848士0．0091rag／ram3，吸水溶胀率为1042．0士38．2％，亲水性良好。支架降解率2周为17．2±1．3％，4周为37．6±2．5％。结论支架的主要成分为Ⅱ型胶原及GAGs，与软骨基质成分接近，支架的孔径、孔隙率、密度、溶胀率、降解率等均附合软骨支架的要求。关键词脐带沃顿胶，软骨支架，软骨组织工程，细胞外基质第三章新型生物软骨支架的生物学性能的检测目的通过对制备出的新型生物材料支架的毒性试验及生物相容性进行检测，探讨其作为软骨组织工程支架材料的可行性。方法提取支架的浸提液行

8、皮内刺激试验、热原试验、溶血试验，采用MTT法检测不同浓度材料浸提液对细胞的毒性