pei-alginate纳米粒转染vegfr-3 sirna后抑制内皮祖细胞淋巴管新生的作用

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1、复旦大学万方数据学校代码：10246学号：09211010033硕士学位论文皮祖细胞淋巴管新生的作用EffectsofVEGFR-3siRNAdeliveredwithPEI—alginatenanoparticlesoninhibitinglynlphangiogenesisofendothelialprogenitorcells院系：上海医学院专业：人体解剖与组织胚胎学姓导名：李婷师：王海杰教授导师组成员：谭玉珍教授万方数据复旦大学硕士学位论文目录英文缩写目录中文摘j}～⋯一⋯～⋯一⋯～⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯一⋯一⋯一一⋯⋯⋯一5妻E文摘要}～⋯一⋯一一⋯⋯一⋯⋯一⋯一⋯一⋯一⋯～一⋯一一～．一79材料和j亨津一一⋯⋯～一一⋯一⋯一⋯一⋯一一⋯⋯⋯⋯⋯一⋯一．121多裂睑席j，斗⋯⋯⋯～⋯一～⋯⋯⋯⋯⋯⋯一一一一一⋯⋯⋯⋯～⋯122仪器和试剂2．1仪器⋯⋯一一⋯⋯一⋯一一⋯一一一⋯⋯～⋯一一一⋯一122．2试剂⋯⋯一⋯一⋯⋯⋯⋯一一一一⋯～一⋯⋯⋯⋯⋯一一⋯⋯一133LEPCs的分离和鉴定143．1Percoll工作液的配制⋯～⋯一一一⋯⋯一一一～一⋯⋯一～一1‘l3．2单个核细胞的分离3．

3、3流式细胞仪分析3．4免疫细胞化学染色3．5LEPCs的扩增14～一154PEI-alginate纳米粒和纳米复合物的制备和特征检测164．1制备PEI-alginate纳米粒和PEI-alginate／siRNA纳米复合物⋯一．164．2琼脂糖凝胶电泳检测PEI—alginate纳siRNA的效率～～．164．3PEI．alginate／siRNA纳米复合物毒性检测4．4PEI．alginate／siRNA纳米复合物转染效率检测175PEI-alginate／siRNA纳米复合物在细胞内的分布

4、和降解～一一一一～一．175．1扫描电子显微镜标本制各及观察一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一．175．2透射电子显微镜标本制备及观察————一一⋯⋯⋯⋯～一186VEGFR-3siRNA的筛选．1819206．1细胞内总RNA的提取6．2RT-PCR分析6．3琼脂糖凝胶电泳⋯⋯一7PEI-alginate／siRNA纳米复合物抑制淋巴管新生实验⋯～．7．1细胞活性检测7．2PCNA染色一1．．．．．．．．．．．．．．20万方数据复旦大学硕士学位论文目录7．3Transwell跨膜迁移实验7．4Matr

5、igel凝胶内毛细淋巴管样结构形成实验8统计学分析一一．．22结果⋯～一⋯一⋯一一一～一⋯一一⋯⋯⋯一一一一一～一⋯231LEPCs的生物学特征2PEI-alginate／siRNA纳米复合物的特征2．1PEI—alginate纳米粒包封siRNA的效率2．2不同N／P比值的PEI．alginate／siRNA纳米复合物的毒性2．3PEI—alginate／siRNA的粒径、电荷和转染效率253PEI-alginate／siRNA纳米复合物在细胞内的分布和降解⋯一一一～一一263．1PEI-al

6、ginate／siRNA纳米复合物的特征和分布263．2PEI-alginate／siRNA纳米复合物在细胞内的降解．⋯⋯⋯⋯一．-274VEGFR-3siRNA的筛选一⋯⋯一～⋯⋯⋯⋯～⋯⋯⋯⋯⋯一⋯一一285PEI-alginate纳米粒转染siRNA后抑制LEPCs介导的淋巴管新生⋯一-295．1LEPCs的活棚液化5．25-35．429LEPCs的增建【变化～一一～⋯一～一⋯⋯⋯⋯一⋯⋯一⋯一．-30LEPCs的迁移变化⋯⋯一⋯⋯～⋯⋯一一⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯一3l毛细淋巴管样结构的形成全文

7、小结32—-⋯⋯⋯一⋯⋯一⋯～⋯⋯⋯一一一一一⋯34参考文献．⋯一⋯一⋯一⋯⋯⋯39gg}述⋯～⋯一一⋯～⋯～一⋯⋯一⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯一一⋯⋯⋯一一．47致谢附录25758万方数据复旦大学硕士学位论文英文缩写ABSACDl33CD34CLSMDAPIDEPCDLSDM匣MDMSOdsRNAEBEDl’AEPCFACSFBSFITCLECLEPCIYVE．1mRNAMTTPBSPCNAPEIRISC英文缩写英文全称AbsorbenceBovineserumalbuminClustersofdiff

8、erentiation133Clustersofdifferentiation34Confocallaserscanningmicroscope4，6一diamidino一2—2phenylindileDiethylpyrocarbonateDynamiclightscatterDulbecco’SmodifiedeaglemediumDimethylsulfoxideDouble．strandedRNAEthidiumbromideEthylenediaminetetraaceticacidE