shrna抑制小鼠肝癌hca-p细胞annexin a7基因表达对增殖及迁移能力的影响

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1、shRNA丰印韦0，卜鼠肝癌Hca．P细胞AnnexinA7基因表达对增殖及迁移能力的影响计：学位论文：33页表格：13个插图：10幅王庆指导教师：唐建武教授申请学位级别：硕士学位专业名称：病理学与病理生理学论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明lIIIIIIIIIIll1111111IIIIIitl1111IIIY2283222本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成

2、果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：o／～签字日期：2012年S月'弓日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯·1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOOOOOOO⋯⋯⋯OOOOOOO⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(、一，)日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯)(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ODOOOO⋯⋯⋯32五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33shRNA抑制小鼠肝癌Hca—P细胞AnnexinA7基因表达对增殖及迁移能力的影响硕士生姓名：王庆指导教师：唐建武教授专业名称：病理学与病理生理学摘要背景：在恶性肿瘤中，原发性肝癌是致死率最高，恶性程度最高的肿瘤之一，根治性

5、手术切除是首选的治疗方法，但是术后五年的复发率及转移率仍然居高不下。恶性肿瘤最重要的生物学特性之一是转移潜能，肝癌属于上皮来源恶性肿瘤，其早期转移的主要方式是淋巴道转移。这种区域性淋巴结转移，是恶性肿瘤病患预后差、死亡率高最重要的影响因素。因此，对于肝癌淋巴道转移潜能相关基因的研究，有助于使恶性肿瘤病患复发率及死亡率降低，为临床应用提供新的治疗思路。目的：1．构建pGPU6／GFP／Neo—shRNA—AnnexinA7和pGPU6／GFP／Neo．shRNA．NC表达载体，稳定转染至Hca．P细胞。2

6、小鼠肝癌Hca—P细胞AnnexinA7表达水平下调后，研究PAnxa7下调细胞增殖及迁移能力的变化。探索小鼠肝癌Hca．P细胞生物学行为，在AnnexinA7表达水平改变后的影响。方法：1．构建pGPU6／GFP／Neo—shRNA．AnnexinA7和pGPU6／GFP／Neo．shRNA-NC表达载体，稳定转染至Hca．P细胞，得到PAnxa7下调细胞、PATl。。7无关序列细胞。P细胞和PAll。。7无关序列细胞作为阴性对照。2．应用RealtimeqRT．PCR在mRNA水平和Westernb

7、lot在蛋白质水平验证，在Hca．P细胞AnnexinA7基因表达水平下调。应用CCK8细胞增殖实验研究PAnx。7下调细胞增殖能力的改变。应用Transwell小室细胞迁移实验探讨PAllx。7下调细胞迁移能力的改变。结果：1．经过自动基因测序仪测序鉴定，表达载体的测序结果与设计序列相符，说明目的基因成功构建表达载体。表达载体pGPU6／GFP／Neo．shRNA—AnnexinA7和pGPU6／GFP／Neo．shRNA—NC稳定转染至Hca．P细胞，24小时后使用倒置荧光显微镜观察转染效率，可见绿

8、色荧光蛋白表达。2．RealtimeqRT—PCR和Westernblot结果验证，Hca—P细胞AnnexinA7基因表达水平明显下调，可作为细胞生物学实验中的研究对象进行后续实验。CCK8实验表明PAnx。7下调细胞增长幅度显著低于P细胞和PAn。。7无关序列细胞，说明Hca．P细胞AnnexinA7基因表达下调后PAn。。7下谓细胞增殖能力明显下降。Transwell小室实验表明PAn。。7下调细胞饥饿培养后穿越Transwell小室