rack1基因表达下调抑制小鼠肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力

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1、中图分类号密级Rackl基因表达下调抑制小鼠肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力DownregulationofRack1expressioninhibitsproliferation，mlgrationandtheinVasloncapacitiesO士mOUsehepatocellular·●‘‘，、‘··‘carcinomacells计：学位论文：46页表插格：13个图：12幅指导教师：唐建武教授孟津伊申请学位级别：硕士学位学科(专业)：病理学与病理生理学培养单位：大连医科大学完成时间：二。一三年五月答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进

2、行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：勃室堡签字日期：丝年上月兰日关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫

3、描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1．保密口，在年解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名’多挈步吼M年s月珈日导师签名：歹荔&差多以)日期：如，弓年占月沏日口三王目永一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7(一)日IJ舌“⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯00D00⋯81．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯··Q00⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．1动物和细胞系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．2主要仪器及试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1载体构建与验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O2．2稳定转染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．3实时荧光定量PCR检测各组稳定转染Hca—F细胞中Rackl基因的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．4Westernblot比较各组稳定

5、转染Hca．F细胞中Rackl蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．5CCK8实验检测FRackl下调后对细胞增殖能力影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．6Transwell小室检测FR∽kl下调后对细胞迁移能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．7ECM胶Transwell小室检测FR∞k1下调后对细胞侵袭能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯00⋯⋯17(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．载体构建验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．稳定转染后荧光显微镜下细胞绿色荧光蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯·⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯·193．qRT—PCR检测各组稳定转染Hca．F细胞中Rackl基因的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯194．Westernblot检测Hca．F和Hca-P细胞中Rackl蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯205．Westernblot检测各组稳定转染Hca—F细胞中Rackl蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯206．CCK8实验检测FR∽kl下调后对细胞增殖能力的影响⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯217．Transwell小室检测FRackl下调后对细胞迁移能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯228．Transwell小室检测FRackl下调后对细胞侵袭能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··36(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯