凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)和罗氏沼虾(macrobrachium rosenbergii)卵黄蛋白原mrna合成部位的初步研究

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1、学校代码：10264研究生学号M090101086上海海洋大学硕士学位论文凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）和罗氏沼虾题目：（Macrobrachiumrosenbergii）卵黄蛋白原mRNA合成部位的初步研究Studyonsiteofvitellogeninsynthesisinthe英文题目：shrimpLitopenaeusvannameiandMacrobrachiumrosenbergii专业：水产养殖研究方向：水产动物繁殖与发育生物学姓名：李媛媛指导教师：蔡生力二O一二年

2、四月五日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版

3、，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注赵金良上海海洋大学教授主席马凌波东海水产研究所研究员委员邹曙明上海海洋大学教授委员李云上海海洋大学讲师秘书答辩地点水产与生命学院答辩日期2012.5.23A

4、208上海海洋大学硕士学位论文凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）和罗氏沼虾（Macrobrachiumrosenbergii）卵黄蛋白原合成部位的初步研究摘要甲壳纲十足目是我国水产养殖业的主要经济种类。卵黄积累是甲壳动物卵母[1][2]细胞发育成熟的必要前提，也是雌性个体生殖周期中的关键阶段。虾类胚胎发育以及无节幼体发育完全依赖于卵黄来满足营养需要。卵黄蛋白在甲壳类中的合成部位一直以来是一个争论不休的话题，就目前的研究成果看来，内源性合成和外源性合成都有报道。本实验选择甲壳纲十足目对下

5、派的凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）和真虾派的罗氏沼虾（Macrobrachiumrosenbergii）为研究对象，通过荧光定量PCR和Northern杂交的方法，初步探讨其卵巢发育不同阶段卵黄蛋白原的合成部位以及相对合成量。根据卵巢发育情况把凡纳滨对虾的卵巢分为6个时期：卵原细胞增殖期，卵黄发生前期，初级卵黄发生期，次级卵黄发生期，成熟期，恢复期。把罗氏沼虾的卵巢分为5个发育阶段：卵黄发生前期，初级卵黄发生期，次级卵黄发生期，成熟期，抱卵期。雌性凡纳滨对虾和罗氏沼虾分别提取卵巢和

6、肝胰腺的总RNA，设计特异性引物进行荧光定量PCR扩增，对卵黄蛋白原mRNA表达进行相对定量分析。凡纳滨对虾的荧光定量PCR结果表明：在卵巢中，随着卵巢的发育，卵黄蛋白原mRNA的相对表达量不断增加，分别为：1.1,5.9,10.4,26.9,85.0，产卵以后急剧减少，为1.6。在肝胰腺中，随着卵巢发育，相对表达量不断增加，分别为：1.3,3.3,7.1,37.3,51.6，产卵以后急剧减少，为1.0。肝胰腺在次级卵黄发生期卵黄蛋白原mRNA增加明显，卵巢在成熟期卵黄蛋白原mRNA增加明显。同时，No

7、rthern杂交结果显示，卵巢和肝胰腺在大于6.0kb的位置都有杂交信号的出现。尤其在初级卵黄发生期，次级卵黄发生期和成熟期的卵巢和肝胰腺中都检测到了比较强烈的杂交信号，并且杂交信号有随着卵巢的发育不断增强的趋势，而且在成熟期，肝胰腺中的杂交信号要明显弱于卵巢。罗氏沼虾的荧光定量PCR研究表明：在卵巢和肝胰腺中都有卵黄蛋白原mRNA的表达。随着卵巢的发育，肝胰腺中卵黄蛋白原mRNA的相对表达量不断增加，分别为：3.4,12.6,15.2，并在成熟期达到最大，为38.9，产卵以后为2.9，而卵I上海海洋大

8、学硕士学位论文巢在整个发育过程中对卵黄蛋白原合成的贡献比较小，分别为1.0,1.3,1.7,4.8,1.5,除成熟期外，其他各期差异不显著。同时，Northern杂交结果表明在次级卵黄发生期和成熟期的肝胰腺中有较明显的杂交信号的出现，并且杂交信号随着卵巢的发育而增强。在卵巢中则没有检测到非常明显的杂交信号的出现。这与荧光定量PCR中的结果吻合。与凡纳滨对虾相似，罗氏沼虾的卵黄蛋白原的相对表达量也是随着卵巢的发育不断增加，在成熟期达到最大，抱