5aza-c对菊花dna甲基化及基因表达的影响

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1、EFFECToF5．AZACoNDNAMETHYLAITIONANDGENE．EXPRESSlONOFCHRYSANTHEMUMADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniVersi妙i11PanialFulfillmentofmeRequirements蠡wtheDe铲eeofMasterofScienceByZ办“Q砌9加Supervisor：ProfW抽gZichengDate：May，2014关于学位论文独创声明和学术诚信承诺～～二f黜糕本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明：所呈交

2、的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果。也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位申请人(学位论文作者)签名：朱芹督2014卑岁月／彳日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了解并同意河南大学有关保留、使用学位

3、论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文(纸质文本和电子文本)以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本和电子文本)。(涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书)学位获得者(学位论文作者)签名：学位论文指导教师签名：歹，＼纩年√氏午菏⋯掳⋯甄唆摘要本实验采用0、100、200、400¨M四个浓度的5．氮杂胞苷(5．azaC)溶液分别对菊花品种“泉乡冲天”室外苗进行在体处理。观察记录叶片形状、植

4、株高度和开花时间，测定生理指标叶绿素和丙二醛的含量。应用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)和高效液相色谱(HPLC)检测各样本基因组DNA甲基化比例及模式。分析菊花表型变化与基因组DNA甲基化变化的关系。利用cDNA扩增片段长度多态性(cDNA．AFLP)进行基因差异表达分析，从而尝试揭示DNA甲基化对于菊花生长发育及基因表达的作用机制。实验结果如下：(1)表型：5．azaC处理30天后，和对照相比叶片发生卷曲。除此之外，菊花植株发生矮化，四组材料之间株高均有显著性差异，而且有剂量累加效应。去处理20天后，100州处理组株高恢复和对照相近，200、400州

5、处理组恢复较慢，依然和对照有显著差异。开花时间和5．azac的浓度相关，但不是规律性的正相关或负相关。四种浓度处理组的开花时间均有差异，和对照相比，100州和200州处理组花期分别提前9天和16天左右，并且，待三组菊花完全开放时，观察花型没有差异，说明5．azaC的处理没有影响其观赏价值。400州处理组花期推迟3天左右。这表明高浓度的5．azac有抑制作用。(2)生理指标检测：表型的变化和生理反应密切相关，所以本实验对相关的生理指标进行了检测。各样本叶绿素含量：100pM、200州叶绿素含量稍高于对照组，400州含量最少。丙二醛含量：400州处理组丙二醛

6、含量最高、其它三组相当。由此看来，低浓度的5．azaC对菊花的生理反应影响不大，高浓度的5．azaC对细胞有一定的伤害。(3)甲基化水平检测：以浓度为100、200、400州的甲基化抑制剂5．azaC处理和未处理的菊花叶片基因组为材料，利用MSAP和HPLC技术对基因组DNA甲基化变化进行分析。结果发现，和对照组相比，各处理组甲基化水平均有所降低，并且随着5．azaC浓度的增加，甲基化降低的幅度也增加，而降低的趋势趋于平缓。(4)基因差异表达分析：以浓度为100、200、400州的甲基化抑制剂5．azaC处理和未处理的菊花叶片总RNA为材料，利用cDNA

7、-AFLP技术进行基因差异表达分析。结果显示，24对引物组合扩增出772条转录衍生片段(TDF)，各处理组与对照相比均有差异表达条带，其中100州处理组上调表达条带25个；200州处理组上调表带的条带30个；400¨M处理组上调表达的条带22个。选取提前开花组100-400bp之间的16条片段进行克隆测序，成功的10条，7条可以在NCBI中找到同源序列，为己知功能的基因，还有3条为未知基因。其功能主要参与信号转导、蛋白质代谢和抗病。关键词：菊花，5．氮杂胞苷，DNA甲基化，基因差异表达ABSTRACT1Iltllisstlldy，tllechrysaJl

8、tllemumoutdoorseedliIlgsof“Qu锄)【iangchon