冷冻技术对精子印记基因dna甲基化及结构影响的研究

《冷冻技术对精子印记基因dna甲基化及结构影响的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、《碱如皆净促中刮＾將＞硕±研究生学位论文北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３学号：Ｓ２０１２０２０００６硕±学位论文冷冻技术巧精子巧记基因ＤＮＡ甲基化及结构影响的研究所院；国家卫生计生委科学技术研巧所姓名：杨向讳指导教师：谷翊群导师小组：卢文红谷翊群学科专业：外科学研究方向；生殖医学１完成日期：２０５年４月３０日化杰切？和岳学晚＆中国区举科学化。青华大学区学却Ｊ项壬巧究生学化４＾丈目录摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３前言５正文９一第部分：冷冻技

2、术对精子印记基因ＤＮＡ甲基化影响的研究９１９．实验材料２．实验方法１１３实验结果１８４实验讨论２４第二部分：冷冻技术对精子结构的影响２８１实验材料２８２实验方法２９３实验结果３４４实验讨论３４＂＂第Ｈ部分：雪域圣宝对人类精子影响体外实验３８１实验材料３８２实验方法３９３实验结果４３４实验讨论４５文献综述４７英文缩略词表（Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎ）始義５７个人简历５８独创巧声明５９学位论文版权使用授权书５９比京切■和度学化＆

3、中国臣学科学晚ｒ清半大学区学部ｊ巧壬巧免生学化Ａ丈摘要冷冻技术对精子印记基因ＤＮＡ甲基化及结构影响的研巧１．目的：检测精子库常规精液冷冻技术中冷冻保护剂、冷冻过程及冷冻时间长短Ｈ个因素对精子父源印记基因Ｈ１９及母源印记基因ＭＥＳＴ印记控制区域（ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ，１Ｃ民）的ＤＮＡ甲基化的影响程度，为冷冻精子在表观遗传方面的安全２ＤＮＡ性提供参考依据。．检测精子库常规精液冷冻技术对精子完整性、膜完整性及顶体完整性的影响程度，为冷冻精子在结构方面的安全性提供参考依据．。３检测＂雪域

4、圣宝＂对人类精子影样品响体外实验的效果。．方法；１Ｗ１０例符合精子库捐精条件的正式志愿者为研究对象，将其每份精液样品平均分为４组：Ａ组为新鲜精液，作为对照；Ｂ组加入同体积冷冻保护剂，不冷冻；Ｃ组加同体积冷冻保护剂，冷冻２ｄ；Ｄ组加同等体积冷冻保护剂，冷冻两个月。通过亚硫酸氨盐克隆测序法（ＢＳＰ）分析父源印记基因Ｈ１９及母源印记基因ＭＥＳＴＩＣＲ的ＤＮＡ甲基化状态。２．Ｗ１０例符合精子库捐精条件的初筛志愿者为研究对象，对照组为新鲜精液，实验组加同体积的冷冻保护剂，冷冻７ｄ。通过精子染色质扩散ＳＣＤＤＮＡ６－实验

5、（）检测精子完整性，通过改良簇基二乙酸巧光素／舰化丙晚（６－ＣＦＤＡ／Ｐ（Ｐ）Ｉ）双芙光标记方法检测精子质膜完整性，通过人精子就豆凝集素ＳＡ夷光染色检测精子顶体完整性。３．Ｗ２０例符合精子库捐精条件的初筛志愿者为研ｌ究对象，对照组．５ｍ０．５ｍ．５ｍ０．５ｍ：０ｌ精液与生理盐水混合实验组；０ｌ精液与ｌ；雪域圣宝混合，ＣＡＳＡ计算加药前、０．５ｈ、３ｈ和２４ｈ精子的活动率、平均路径速．５率ＶＡＰ、曲线速率ＶＣＬ和直线速率ＶＳＬ，０ｈ通过ＰＳＡ巧光染色对精子顶体状态３（ＥＬＩＳＡＤＮＡ进行评估，ｈ时通过酶联

6、免疫吸附实验）对精浆中氧化损伤生物标－８－ＯＨＧ）含量进行评估志物（ｄ，２４ｈ时通过伊红苯胺黑法对质膜完整性进行评估。１．ＡＢ、Ｃ、Ｄ１１レ结果：、组Ｈ９基因Ｃ民区的ＤＮＡ甲基化率ッ克隆数计算时分别为５８．７０％、５３．８５％、４９．４６％和４５．７４％，Ｗ邱Ｇ岛数计算时分别为９７．５７％、９７．３３％、９７．１３％和％．５６％，两者都有降低趋势，但组间差异均无统计学意义（ｆ＞０．０５）；四组ＭＥＳＴ基因１Ｃ艮区甲基化率Ｗ克隆数计算时分别为４１．１０％、４５．３３％、４７．３０％５０．６８％Ｇ岛数计算甲基化１．

7、７７７４％、２．００２．２６和，Ｗ邱率时分别为％、１．％和％，（＞化Ａ有升高趋势，但差异亦无统计学意义尸〇５）。２．冷冻７ｄ的实验组ＤＮ完整率为（７４±４．６４）％，与未冷冻对照组（８０±５．４２）％相比，差异有统计学意义（ｆ＜０．０５）（６８±６．２３）（±５２比，差异有；实验组膜完整率为％，与对照组７５．８）％相１此右松和ｓ学化＆中同ｆｅ季科学化ｒ巧华大学￡学却ｊ巧壬研究生学位沁丈统汁学意义０．０５）；实验组顶体完整率为（７７±６．１３）％，与对照组（８２±５．７１）％相比，差异亦

8、有统计学意义（尸＜化０５）。３．实验组不同时点ＣＡＳＡ分析精子活动＜率、ＶＡＰ、ＶＣＬ和Ｖ化结果，与对照组相比，差异均有统计学意义（