asial型口蹄疫标记重组病毒的构建及其生物学特性的研究

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生始砌海时间：讹年乡月／弓日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本

2、人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：导师签名：时间：≯钾争年∥月／刍日时间：御年乡月伽这／一砂碜彦老万方数据J

3、IIIJlIIrlllllllIIIIUIIUfY2697374AsiaI型口蹄疫标记重组病毒的构建及其生物学特性的研究摘要利用反向遗传技术对口蹄疫病毒基因的改造和修饰，可以实现对疫苗种毒的生产性能、抗原匹配性、抗原稳定性、免疫应答能力、生物安全性等特征的改良，能够迅速获得预期生物学特性的疫苗候选株，进而可以减少和避免流行毒株驯化环节带来的负面影响。不仅改

4、变了对流行毒株筛选驯化受病毒自然属性制约、费时费力、成功率低的缺陷，而且可以实现更为主动有效的疫苗毒株的设计，对整体提升疫苗品质和效力具有重大意义。为了鉴定出在口蹄疫病毒插入的位点和获得标记的重组病毒，本研究利用口蹄疫病毒反向遗传操作技术，在RGD+9位点处插入了His标签，获得了含有His标签的FMDV全长cDNA克隆(命名为prAsiaI．9His)。将prAsial．9His质粒转染BHK．21细胞后，能够出现典型的细胞病变。对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光进行鉴定，结果证实，成功拯救了His标签的重组病毒(命名为rAsiaI一9His)，该毒能够稳定表达His标签。最

5、后，比较测定了对BHK．21细胞和乳鼠的致病性，结果表明，该标记毒与亲本拯救的毒株(rAsiaI)具有相似的生物特性。通过对重组毒rAsiaI．9His的致病性试验表明El蹄疫重组病毒可以对牛产生致病性的临床症状。通过对口蹄疫标签毒结构蛋白与非结构蛋白抗体应答检测表明标签毒与野生型AsiaI毒株具有相似性，且利用rAsiaI．9HIS阳性血清对rAsiaI毒株进行中和试验，其r值均为1．0，表明VPl标记毒与流行毒株具有较好的抗原匹配性。含有标签标记的口蹄疫病毒的成功拯救，为深入研究口蹄疫病毒的致病机制以及分子标记疫苗奠定了基础。总之，标签分子的插入不仅为研究FMDV的治病机理提供了一种

6、工具，而且对传统疫苗生产提供了更高水平的纯化手段，并且在区分FMDV感染与免疫动物方面具有重要的作用。关键词：口蹄疫；反向遗传；标记疫苗万方数据ConstructionandCharacterizationofRecombinantTaggedFootandMouthDiseaseVirusofAsiaIAbstractReverse．geneticengineeringoffootandmouthdiseasevirus饵MDV)canimprovetheproductivity,antigenmatching，antigenstability,immuneresponseabilit

7、y,andbiologicalsafetyofvaccines，SOvaccinecandidateswithanticipatedbiologicalcharacteristicscallbepromptlyachieved．NegativeinfluenceintamingofvirulentstrainsCanalsobedecreasedoravoided．Reversegeneticsnotonlymakeupfordeficiencieslikelimitationofviralnature，lOWSuccessrate，andtimeandenergyconsuming，b

8、utalsorealizemoreactivedesigningofvaccines．Therefore，reversegeneticsissignificantinimprovingintegralqualityandefficiencyofvaccines．Toidentifyafeasibleinsertionsiteinthefoot．and．mouthdiseasevirus(FMDV)andobtainataggedre