5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素a对人胃癌细胞系mgc-803细胞增殖和runx3基因表达地影响

《5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素a对人胃癌细胞系mgc-803细胞增殖和runx3基因表达地影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、徐州医学院硕士学位论文thethirdday.Conclusions1.5-Aza-CdRorTSAinhibitedthegrowthofgastriccancerMGC-803celllineandenhancedtheexpressionofRUNX3mRNA.ItshowedthatbothofthemcouldmakeTumorSuppressorGeneRUNX3demethylateandrecoveritsactivity.2.Comparedwith5-Aza-CdRorTSAgroup,

2、jointapplicationof5-Aza-CdRandTSAongastriccancerlineMGC-803couldenhancetheexpressionofRUNX3mRNAandinhibitthecellgrowthsignificantly,whichprovidedthetheoreticalbasisforclinicalcombinationapplication.Keywords5-Aza-2-deoxycytidine;TrichostatinA;Gastriccancer;

3、RUNX3;Demethylation;Histonedeacetylase;Proliferation;Apoptosis6徐州医学院硕士学位论文前言胃癌是常见的消化道肿瘤，严重危害着人类的健康。世界每年有93.4万新确诊病例，其在我国恶性肿瘤的发病率和死亡率中都居于前列。患者由于早期临床症状不典型，就诊时多已到中晚期，增加了手术难度，术后5年生存率较低，甚至失去了手术意义。随着人们对疾病发生发展过程的精确解析，越来越多的证据表明基因遗传信息的紊乱以及基因转录表达调控的紊乱是疾病发生的关键因素[1-3]。

4、目前生物学理论和技术在胃癌研究工作中的应用，使得人们从基因分子水平对胃癌的发生、诊断、治疗有了新的思路，这对胃癌的化学预防及临床治疗就成为胃癌研究的一大课题。基因转录表达调控有多种机制，其中表基因水平的甲基化改变起着非常重要[4]的作用，已成为近年来研究的热点。基因异常甲基化是指抑癌基因启动子区结合了过多甲基，使基因不能转录而失活。它是目前所知的除突变、缺失和移位之外的另一种基因异常改变。抑癌基因启动子区CpG岛的高甲基化，导致转录“沉[5]默”，从而影响其表达，被认为是肿瘤形成的重要机制之一。RUNX3是

5、一种抑癌基因，位于染色体1p36.1，是RUNX家族中最小也是迄今对其研究最少的基因，全长67kb，含有6个外显子和p1、p2两个启动子，两[7]个启动子富含GC，p2启动子GC含量达到64%，易发生甲基化变化。该基因[8-11]在人类多种肿瘤中存在甲基化异常。其在胃癌中主要以基因纯合或杂合缺失[12]以及甲基化方式失活，其中甲基化是表达下调的重要机制。RUNX3CpG区的甲基化是一个多重甲基化变化的，从5’端逐渐播散到RUNX3mRNA转录启动点,当启动过程点甲基化后，转录停止，RUNX3失活，不表达蛋白

6、，TGF-β信号传[13]导通路中断，胃黏膜细胞的增生，凋亡和分化抑制，发生胃癌。因此RUNX3CpG[14]区甲基化在胃癌的发生过程中起着很重要的作用。2002年日本学者Li等首例发现RUNX3有调节胃上皮细胞的增生与凋亡平衡的作用，说明RUNX3的失活7徐州医学院硕士学位论文与胃癌的发生发展有关，可能是胃癌发生发展的关键性抑癌基因。DNA甲基化是在DNA甲基转移酶(DNAmethylationtransferase,DNMT)催化下，以S-腺苷蛋氨酸(SAM)为甲基供体，将甲基转移到CpG双核苷酸胞嘧啶

7、第5位碳原子上。DNA超甲基化状态与抑癌基因沉默、肿瘤形成密不可分，这已得到公认。正常组织中，广泛表达的基因启动子区域CpG岛常处于非甲基化状态；肿[15]瘤细胞中，这些CpG岛常变为甲基化状态，其相关基因的表达亦被关闭。其中CpG岛甲基化抑制基因表达的机制为甲基结合蛋白家族特异性地与甲基化位点结合，然后与组蛋白去乙酰化酶和具有染色体变形活性的sin3a,mi-2或ski蛋白家族形成大分子复合物，使组蛋白去酰基，染色体结构变得更加紧密，基因不能[5-6]转录，导致基因沉默。因此应用甲基转移酶抑制剂和去乙酰化

8、酶抑制剂恢复组蛋白乙酰化，去除异常的甲基化修饰，可以激活抑癌基因，发挥抑癌作用。5-Aza-CdR为一种嘧啶核苷类似物，其可以与DNMT结合形成一种共价复合物，特异性抑制DNMT的活性，逆转基因CpG岛甲基化，重新激活由于高甲基[16]化而失活的抑癌基因，恢复抑癌基因的功能，抑制肿瘤细胞的生长。国外学者应用5-Aza-CdR作用于肿瘤细胞发现：抑癌基因的异常甲基化引起基因表达失活与肿瘤细胞DNMT1mRNA高表达