tpa-pai-1系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的表达

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1、分类号S828学校代码10129UDC11.220学号2009201050tPA-PAI-1系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的表达ExpressionofTissue-TypePlasminogenActivator-PlasminogenActivatorInhibitor-1SysteminBovineCumulus-OocytesduringinvitroMaturation申请人：关洪敏学科门类：农学学科专业：基础兽医学研究方向：动物组织胚胎与发育生物学指导教师：曹贵方教授李海军副教授论文提交日期：二〇一二年六月摘要为了初步了解组织型纤溶酶原激活剂

2、(tissue-plasminogenactivator，tPA)、1型纤溶酶原激活剂抑制剂(plasminogenactivatorinhibitor-1，PAI-1)和纤溶酶原(plasminogen，PLG)在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的潜在作用；本文运用实时定量RT-PCR技术分别检测体外成熟过程中不同时间段（0h、8h、16h、24h）、添加不同浓度卵泡刺激素(follicle-stimulatinghormone，FSH)以及卵泡刺激素受体结合抑制剂(follicle-stimulatinghormonereceptor-bindinginhi

3、bitor，FRBI-10)成熟培养16h后牛卵丘细胞和卵母细胞中tPA、PAI-1及PLG基因相对表达变化，观察添加不同浓度FSH成熟培养16h后卵丘细胞膨胀程度差异，并统计卵母细胞第一极体排出情况。1.卵丘卵母细胞复合体在体外成熟过程中，卵丘细胞和卵母细胞tPAmRNA相对表达量，于体外成熟16h显著高于0h和8h，24h达到最高(P<0.05)；而卵丘细胞PAI-1mRNA相对表达量于8h达到最高，显著高于16h和24h(P<0.05)。卵丘细胞PLGmRNA相对表达量总体趋势和tPA类似，于16h显著高于0h和8h，在24h达到最高(P<0.05)。卵母细

4、胞PAI-1mRNA相对表达量于16h显著高于0h和8h，达到最高，并显著高于24h(P<0.05)。2.在添加不同浓度FSH(0、0.01、0.1和1IU/mL)体外成熟16h的各处理组，卵丘细胞中tPAmRNA相对表达量随FSH添加浓度的升高而升高，当FSH添加浓度1IU/mL，卵丘细胞之间的缝隙连接较为松散且发暗。卵丘细胞中的PAI-1mRNA相对表达量在0.01IU/mLFSH时高于其他各处理组；同时卵丘细胞PLGmRNA表达水平在0.01IU/mLFSH时达到最低，于0.1IU/mL和1IU/mL时显著升高(P<0.05)。卵母细胞tPA表达变化显示出与

5、第一极体排出率相似的趋势，即0.01IU/mLFSH处理组的tPAmRNA水平和第一极体排出率显著高于其他处理组(P<0.05)。卵母细胞中PAI-1mRNA相对表达量在0.01IU/mLFSH时最高，显著高于其他各FSH添加组(P<0.05)。3.在添加FRBI-10体外成熟16h的各处理组，在只添加FSH组的卵丘细胞tPAmRNA相对表达量显著高于其他各处理组(P<0.05)；卵母细胞中tPAmRNA相对表达量在只添加FSH组显著高于空白组(P<0.05)，在只添加FSH组，卵丘细胞和卵母细胞中PAI-1mRNA相对表达量最高，显著高于其他各处理组(P<0.0

6、5)；卵丘细胞和卵母细胞PLGmRNA相对表达量在只添加FSH组却显著低于空白组(P<0.05)。综合以上研究结果，本研究认为：牛卵丘细胞中tPA与PAI-1基因的表达受FSH正向调节，而PLG基因表达却受到FSH的抑制；进而推测，tPA-PAI-1系统对卵丘细胞在体外成熟过程中的扩散并不起促进作用；在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中，tPA-PAI-1系统可能参与对牛卵泡排卵过程的调控。同时，tPA在卵母细胞中的表达是否与其第一极体排出有关，需进一步实验验证。本实验结果为进一步研究tPA-PAI-1系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的具体作用奠定了基础。关

7、键词：tPA；牛；卵丘细胞；卵母细胞；FSH；FRBI-10ExpressionofTissue-TypePlasminogenActivator-PlasminogenActivatorInhibitor-1SysteminBovineCumulus-OocytesduringinvitroMaturationAbstractInthepresentstudy,fourexperimentswereconductedtoinvestigatethepotentialeffectsoftPA,PAI-1andPLGonbovinecumuluscellsandoo

8、cytes