tpa和pai-1在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中作用初探

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1、摘要为了解组织型纤溶酶原激活剂(tissueplasminogenactivator，tPA)和纤溶酶原激活剂抑制剂1(plasminogenactivatorinhibitor，PAI-1)在牛卵丘-卵母细胞复合体（COCs）体外成熟进程中的可能作用；本研究首先运用了实时定量RT-PCR和ELISA技术检测了体外不同成熟时间（0h、8h、16h和24h）卵丘细胞中纤溶酶原（plasminogen）基因相对表达变化和tPA活性变化，然后通过添加不同浓度的tPA（0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml）、

2、PAI-1(0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)观察透明质酸合成酶2（Hyaluronansynthase2,HAS2）基因在体外成熟培养16h牛卵丘细胞中相对表达变化。最后以1ng/mltPA与10ng/mlPAI做添加组合，在体外成熟培养16h后，统计牛卵丘细胞中HAS2基因相对表达，牛卵母细胞中GDF-9、BMP-15基因相对表达，以及牛COCS的扩散程度。结果如下，1.在COCs体外成熟过程中，牛卵丘细胞PlasminogenmRNA相对表达，在成熟8h和24h显著高于0h和16h(P<0.

3、05)；同时卵丘细胞中的tPA活性在成熟培养8h和24h均高于16h且差异显著(P<0.05)。2.分别添加不同浓度tPA、PAI-1(0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)体外成熟16h后，HAS2基因在各tPA添加组卵丘细胞中的相对表达水平低于对照组，其中1ng/ml添加组最低，与对照组相比差异显著(P<0.05)；添加不同浓度PAI-1处理后，在1ng/ml和10ng/ml添加组卵丘细胞中的HAS2mRNA相对表达水平显著高于对照组，其中10ng/ml添加组最高3.以1ng/mltPA和10ng

4、/mlPAI-1做添加组合，在体外成熟16h后发现，在PAI-1添加组中，卵丘细胞的HAS2mRNA相对表达水平显著高于其他各处理组(P<0.05)；卵丘层的扩散程度显著高于对照组和tPA添加组(P<0.05)。同时卵母细胞中BMP-15和GDF-9的mRNA相对表达水平在tPA添加组最高，PAI-1添加组最低，俩者差异显著(P<0.05)。综上，tPA在体外成熟早期（8h前后）可能有重要作用。在体外成熟16h，PAI-1在促进牛卵丘细胞表达HAS2基因和扩散发生的同时又下调了卵母细胞中BMP-15和GDF-9基因的表达水平

5、；而tPA的作用与之相反。故此推测，PAI-1应该是卵丘细胞分泌的并促进其在成熟过程中扩散发生的重要调节因子。关键词：tPA；PAI；牛；卵丘细胞；扩散EffectsoftPAandPAI-1onbovinecumulusoocytecomplexesduringinvitromaturationAbstractInordertounderstandtheeffectsoftissuePlasminogenactivatorandPlasminogenactivatorinbovinecumulusoocytecomplex

6、es(COCs)maturationinvitro,real-timeRT-PCRandELISAtechniqueswereusedtodetecttherelativeexpressionofPlasminogengeneandtPAactivitychangesinbovineCOCsculturedwith0h,8h,16hand24hinvitro,theexpressionofHyaluronansynthase2(HAS2)mRNAincumuluscellfreedfromCOCstreatedwithdif

7、ferentconcentrationoftPAandPAI-1inmaturationmediumandcultured16hinvitro,andHAS2geneexpressionofcumuluscellfromCOCs,therelativegeneexpressionchangesofGDF-9andBMP-15incorrespondingoocytesofCOCstreatedwiththecombinationoftPAandPAIat16hmaturationinvitro,aswellasthediff

8、erencesinthedegreeofbovinecumuluscellexpand.Theresultsareasfollows:1．IntheprocessofCOCsmaturation,therelativeexpressionofPlasminogenmRNAlevelwass