地西他滨联合丙戊酸钠对淋巴瘤细胞株jurkat增殖凋亡影响的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文地西他滨联合丙戊酸钠对淋巴瘤细胞株Jurkat增殖凋亡影响的实验研究姓名：赵宁申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：张学军201203中文摘要地西他滨联合丙戊酸钠对淋巴瘤细胞株Jurkat增殖凋亡影响的实验研究摘要目的：T细胞淋巴瘤(T．celllymphoma)是一种来源于T淋巴细胞的恶性克隆增殖性疾病。目前对其治疗主要是常规化疗，效果差且易复发，需寻找有效药物及其联合治疗方案以提高T细胞淋巴瘤患者的疗效改善预后。表观遗传学对肿瘤的治疗作用越来越受到关注，其中主要包括去甲基化治疗和组蛋白乙酰化治疗。国内外研究已证实淋巴瘤患者及其细胞系中存在异常的

2、高度甲基化，经常发生于富于CpG岛的肿瘤抑制基因(如P15INK4B基因，SHP．1基因，P53基因)启动子区，并导致该基因的沉默。同时也发现存在组蛋白过度去乙酰化。地西他滨(decitabine，DAC)，是一种核苷类似物，磷酸化的地西他滨参与DNA合成，然后与DNA甲基转移酶(DNMTS)共价结合，抑制其活性，造成DNA低甲基化，激活抑癌基因引起细胞分化或凋亡。FDA已经正式批准地西他滨用于治疗骨髓增生异常综合征(MDS)。基础研究表明DAC能够诱导淋巴瘤细胞株Raji中P15INK4B基因去甲基化和表达增强，从而抑制肿瘤细胞增殖。丙戊酸钠(sodiumvedproat

3、e，vPa)从1970年用于治疗癫痫。最近的研究显示，VPA可以抑制组蛋白去乙酰化酶，调节细胞周期，诱导肿瘤细胞凋亡，和抑制血管生成，对淋巴瘤亦有抗肿瘤作用。故DAC与VPA两者有联合用药的可能。为进一步明确地西他滨对淋巴瘤细胞增殖及促凋亡的机制，本实验选用人类T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株，观察地西他滨对Jurkat细胞增殖的抑制以及诱导凋亡作用，及VPA与DAC联合对上述作用的影响。并检测甲基化酶洲T3AmRNA表达的变化，为T细胞淋巴瘤新的治疗方法提供理论依据。方法：l常规方法培养人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株，每24小时传代一次。选用对数期细胞进行试验。2MTT法

4、检测不同浓度的地西他滨、丙戊酸钠单药及二者联合应用对中文摘要Jurkat淋巴瘤细胞增殖的影nI；

5、J：DAC的浓度分别为10、50、1009mol／L，VPA的浓度分别为1、2、3mmol／L，DAC(109mol／L)分别和VPAl、2、3mmol／L三个浓度联合，单药组分别作用24h、48h、72h观察Jurkat细胞的抑制率，联合用药组观察48hJurkat细胞的抑制率，并用金正均公式计算联合用药是协同作用还是拮抗作用，计算公式为：Q=EAB／(EA+EB—EAEB0EA和EB为各药单用抑制率，EAB为两药合用抑制率。o．85<_Q5_1．15为相加作用，Q艺1．15

6、为协同作用，

7、比较应用单因素方差分析，P<0．05为有差异，提示有统计学意义。结果：l地西他滨对Jurkat细胞增殖抑制的影响不同浓度的DAC作用于Jurkat细胞24h、48h、72h后，发现随着药物作用浓度的增加和作用时间的延长，增殖抑制率由14．67％增力nN80．6％，各处理组之间，以及处理组和对照组之间统计学分析，差异有统计学意义(P<0．05)。DAC抑帛1]Jurkat细胞增殖，并呈时间、剂量依赖性。2丙戊酸钠对Jurkat细胞增殖抑制的影响不同浓度的丙戊酸钠作用于Jurkat细胞24h、48h、72h后，发现随着药物作用浓度的增加和作用时间的延长，增殖抑制率由14．47％

8、增加到77．51％，各处理组之间，以及处理组和对照组之间统计学析，差异有统计学意义(P<0．05)。VPA抑NJurkat细胞增殖也呈时间、剂量依赖性。3地西他滨对Jurkat细胞凋亡的影响流式细胞术分析结果显示，DAC作用于Jurkat细胞，随时间延长和药物浓度的增加，细胞凋亡率由18．9％增力nN47．2％。统计学分析显示各处理组之间，处理组和对照组间均有统中文摘要计学差异(P