褪黑素对胰腺腺泡细胞钙超载的调节及其作用机制的研究

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1、温州医学院硕士学位论文褪黑素对胰腺腺泡细胞钙超载的调节及其作用机制的研究姓名：张浩申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：吴建胜2012-05-25温州医学院硕士学位论文褪黑素对胰腺腺泡细胞钙超载的调节及其作用机制的研究中文摘要目的观察大鼠急性坏死性胰腺炎(acutenecrotizingpancreatitis，ANP)胰腺腺泡细胞钙超载的调节作用及CaMKII(Calcium／calmodulin--dependentproteinkinaseII)表达的变化，探讨褪黑素(melatonin，MT)对大鼠急性坏死性胰腺炎胰腺损伤的保护作用。方法1．54只SD大鼠随即分为假手术组(S0组

2、)、急性坏死性胰腺炎组(ANP组，胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠法造ANP模型)和MT组(腹腔注射MT后30min行ANP造模)，每组18只。假手术仅开腹后翻动肠管，手术后每只大鼠皮下补充生理盐水2ml。2．造膜成功后，分别于术后1、4、8h分批处死大鼠，取新鲜胰腺组织，一部分固定于4％多聚甲醛液中，待行组织病理学检测；一部分置冻存管中于液氮中保存，进行realtime-PCR及WesternBlot检测；另一部分新鲜组织进行体外消化为单细胞悬液，检测胰腺腺泡细胞内的钙离子浓度。3．苏木精一伊红染色观察胰腺病理变化，常规行病理学评分，荧光控测法测定胰腺组织内游离钙离子浓度，实时荧光定量PCR及免

3、疫印迹法分别检测胰腺细胞中CaMKIImRNA和蛋白表达水平。4．计量资料以(x±S)表示，应用SPSSl8．0统计软件进行分析，根据样本的性质采用t检验、单因素方差分析、LSD—t检验和Dunnet73检验。以P

4、游离钙离子浓度均较SO组明显增高(1、4、8h时的手值分别为13．09、18．58、16．56，P值均=0．00)，MT组较SO组略高，但较ANP组明显降低(1、4、8h时的亡值分别一10．03、一11．75、一11．02，P值均=O．00)。3．Ca~Ⅱ(II的表达与SO组相比，CaMKII在ANP组mRNA和蛋白的表达均明显升高，而MT对其表达有明显的抑制作用，差异有统计学意义(P(0．05)，且Ca胍II的表达与细胞内钙离子浓度呈正相关。结论MT干预可抑制Ca胍IImRNA及蛋白的表达，从而减轻胰腺腺泡内钙超载，起到保护胰腺组织作用。关键词胰腺炎，急性坏死性；褪黑素；钙／钙调素依赖性

5、蛋白激酶II；钙超载6温州医学院硕士学位论文TheResearchonMelatonin’SAdjustmentandProtectiveMechanisminPancreaticAcinarCellwithCalciumecanlsmancreatlce1thOverloadAbstractObjectiveObservetheregulationofpancreaticacinarcellwithcalciumoverloadandtheExpressionchangesofCalcium／calmodulin--dependentproteinkinaseII(CaMKII)inra

6、twithacutenecrotizingpancreatitis，toinvestigateMelatonin’Sprotectivemechanisminpancreaticacinarcellwithcalciumoverload．Method1．Fifty—fourmaleSprague—Dawley(SD)ratswererandomlydividedintothreegroups：sham—operationgroup，ANPgroupandMT—pretreatedgroup．ThemodelsofANPwereinducedbyretrogradeinjectionsodi

7、umtaurocholateintothebili-pancreaticduct．MTgroupwasundergoneintra——peritonealinjection50mg／kg30minutesbeforetheestablishmentofANPmodels．Shamoperationonlyturningtheintestineaftersurgery．eachratsubcutaneoussuppleme