低分子硫酸软骨素的制备及对软骨修复作用的研究

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1、摘要目的研究低分子硫酸软骨素的制备方法，并探讨其对软骨的修复作用。方法1、称取一定量分子质量在5万以上的硫酸软骨素(ChS)，在一定温度和条件下分别用HCl、H202和硫酸软骨素裂解酶EAC对其进行降解，反应结束后用乙醇沉淀、脱水、干燥，产物用高效液相色谱仪测定分子量。2、建立新西兰大白兔膝关节软骨缺失模型，36只新西兰大白兔随机分成6组，分别为对照组[蒸馏水0．49／(kg·d)]、模型组[蒸馏水0．49／(kg·d)]、低分子量ChS低剂量组[低分子硫酸软骨素0．29／(kg·d)】、低分子量ChS高剂量组[低

2、分子硫酸软骨素0．49／(kg·d)]、高分子量ChS低剂量组[高分子硫酸软骨素0．29／(kg‘d)]和高分子量ChS高剂量组[高分子硫酸软骨素0．49／(kg·d)]，每组6只，分别进行灌胃给药。记录各组实验用兔的体重、生存时间和生活状况，对关节软骨缺损部位修复情况和病理组织学切片进行观察。应用ELISA法检测兔关节液67II：一1p、TNF—a并ITGF．p的水平，并采用全自动生化分析仪及其配套的试剂盒对兔血清中钙、磷含量进行测定。结果1、经高效液相色谱法测定，硫酸软骨素原料的分子量为55426。用HCl降解

3、得到的ChS，分子量为3936，颜色从白色转变成红褐色，产物粘性较大，产率较低为48．71％；而用H202在酸性条件下和用硫酸软骨素裂解酶EAC降解所得到的硫酸软骨素，降解效果较好，分子量分别为4217和4565，其外观较好，产物为乳白色，其产率分别达到64．45％3191．6％。2、造模后伤口愈合情况较好，实验用兔生活状态和精神状态良好。造模后各组体重均有下降，但模型组与其余给予ChS组相比，体重下降明显。低分子ChS组，其软骨表面较为平整，凹陷基本己填充，较模型组与高分子ChS组效果明显。在HE染色状态下，损伤

4、修复处均可见初期修复反应，并且给予低分子ChS组效果要优于高分子ChS组和模型组。3、低分子ChS和高分子ChS都能够减少关节液中炎性因子的含量和增加TGF．p的含量(P

5、能是因为低分子ChS，分子量较小，机体易于吸收，生物利用度提高，从而使得伤口愈合和软骨修复的作用较为明显。3、高、低分子量的ChS都可以增加TGF．13的含量，降'f氐IL．113、TNF．O【和血清中钙、磷的含量。且低分子ChS要优于高分子ChS。对于软骨修复，这可能是通过对上述因子的影响，从而产生积极的作用。硕士研究生裴彤(药物化学)指导教师高华教授关键词：硫酸软骨素；低分子量；降解；软骨修复；炎性因子ResearchoftheMethodforPreparingLowMolecularWeightChondr

6、oitinSulfateandEffectofitonCartilageRepairObjectiveAbstractToinvestigatethemethodforpreparinglowmolecularweightchondroitinsulfate，andtoexploretheeffectofitonCartilageRepair．Methods1、Weighacertainamountofchondroitinsulfate，itsmolecularweightisapproximately50000

7、．DegradingwithHCl，H202andChSaseEACatacertaintemperatureandconditions．Aftercompletionofthereaction，utilizing95％ethanoltoprecipitateanddehydrate．Theproducts’molecularweightweredeterminedbyhighperformanceliquidchromatography．2、Establishkneearticularcartilagedefec

8、tmodelsonNewZealandrabbits．36NewZealandrabbitswererandomlydividedinto6groups(6ineachgroups)：controlgroup[distilledwater0．49／(kg’d)]，modelgroup[distilledwater0．49／(kg’d)]，low—doseof