乏氧与notch1对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

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1、万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13背景⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。14第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17材料与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22结果与附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37材料与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42结果与附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49讨论⋯⋯⋯·⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯。54结论⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯·一⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．56参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57j变谢⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯····⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．⋯61万方数据攻读学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯．63“㈣洲㈣㈣㈣洲0Y2722623万方数据泰山医学院硕士学位论文乏氧与Notchl对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响研究生：李斑斑专业：内科学(血液病)导师：滕清良教授中文摘要第一部分乏氧环境

4、对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响研究背景：多发性骨髓瘤(MM)是骨髓内浆细胞克隆性增殖为特征的血液系统恶性肿瘤Il】，研究表明，多种恶性肿瘤由于异常增殖和过度生长会导致瘤体内出现乏氧环境，因此乏氧被认为是影响肿瘤生长的重要微环境因素之一，且为许多实体瘤的共同特征，其可通过促进靶基因的转录，引起新生血管的形成、糖酵解以及红细胞生成增加‘21。同样骨髓内细胞间的微环境对MM细胞的增殖起到至关重要的作用【31。有研究检测到在MM鼠模型以及MM患者骨髓骨髓微环境处于乏氧状态【4^61。但目前乏氧状态对骨髓瘤细胞生长、增殖及凋亡的影响及机制仍不清楚。相关文

5、献表明：恶性肿瘤包含不同范围的氧分压，从有良好脉管区域大约5％02到坏死部位完全的无氧，平均的氧分压大约为1％02，且在许多多发性骨髓瘤的乏氧研究中，多应用1％的氧气浓度‘21。我们旨在体外模拟MM细胞生存的骨髓乏氧微环境，探讨乏氧对MM细胞生长和凋亡的影响及分子机制，为肿瘤治疗新方向提供依据。研究目的：探讨乏氧环境对人多发性骨髓瘤RPMl8226细胞系增殖和凋亡的影响及其分子机制。研究方法：l、细胞培养：体外培养MM细胞株RPMl8226细胞，取对数生长期细胞进行实验，细胞分别放入常氧培养箱及连接OxycyclerC42可编程氧气控制器乏氧细胞培养

6、万方数据泰山医学院硕士学位论文箱，调节细胞生长条件为常氧环境(37。C、21％02、5％C02)及乏氧环境(37"C、1％02、5％C02)。2、CCK一8方法检测不同时间段乏氧对细胞增殖的影响：将MM细胞分别置于实验组(乏氧环境)及对照组(常氧环境)细胞培养箱培养72h，分别选择不同时间段12h、24h、48h、72h培养的瘤细胞，应用CCK．8方法检测实验组、对照组不同环境培养对RPMl8226细胞增殖的影响。3、细胞术检测乏氧环境对MM细胞周期的影响：乏氧及常氧环境分别作用于MM细胞12、24小时后收集细胞，PI染色后用流式细胞仪测定DNA含量

7、并分析细胞周期变化。4、细胞术检测乏氧环境对MM细胞凋亡的影响；乏氧及常氧环境分别作用于MM细胞24小时后收集细胞，使用AnnexinV．FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡变化。5、RT-PCR方法检测细胞HIF-la及增殖相关基因p21、p27、CyclinDl的mRNA水平变化：乏氧及常氧环境分别作用于MM细胞24小时后收集细胞，Trizol方法提取细胞总的RNA，测定浓度后反转为cDNA。RT—PCR方法检测HIF—la、p21、p27、CyclinDl的mRNA水平变化。6、Westernblot检测细胞HIF—la蛋白表达变化：常氧及乏

8、氧环境分别作用于MM细胞24小时后收集细胞，提取蛋白并测定蛋白浓度，蛋白质印迹法检测不同环境下HIF—la蛋