去甲斑蝥素对人多发性骨髓瘤细胞株U266增殖及凋亡的作用及其机制的研究

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1、主塞垫墨去甲斑蝥素对人多发性骨髓瘤细胞株U266增殖及凋亡的作用及其机制的研究摘要研究背景：随着社会老龄化的到来及诊断技术的提高，多发性骨髓瘤在人群中的发病率呈现增长的趋势，且发病趋向年轻化，所以多发性骨髓瘤的治疗越来越引起血液学医生的重视。多发性骨髓瘤是来源于浆细胞系的血液系统恶性肿瘤，主要表现为血液、免疫、骨骼及肾脏等方面的改变，发病多为60岁以上的老年人，传统化疗的副作用较大且缓解率低，病人耐受力较差，总生存期短。目前，临床已将去甲斑蝥素(norcantharidinNCTD)广泛应用于肝癌、食管癌等实体瘤化疗的辅助治疗，

2、收到了喜人的效果，也吸引了许多研究工作者对其抗肿瘤机制进行深入细致的研究，并取得了相当不错的成果这些研究成果～方面为癌症治疗的临床用药提供了理论依据，另一方面也拓展了对恶性肿瘤的治疗手段，斑蝥中的有效成分是斑蝥素(can，cA)，可抑制细胞蛋白质的合成，影响细胞的生长分化，但因其对泌尿系有强烈刺激作用，限制了其在临床的推广应用，NCTD是将CA去除1，2位两个甲基合成而得，具有显著的抗癌活性，其毒副作用较低，也是目前唯一具有升高白细胞作用的抗肿瘤药物，对常见实体肿瘤：肝癌、食管癌、结直肠癌、肺癌、胆囊癌、卵巢癌、黑色素瘤及血液系

3、统肿瘤中．的早幼粒细胞白血病、T淋巴细胞白血病等细胞的体内外生长均有明显的抑制作用，实验表明：NCTD能在细胞毒作主奎垫塞用、诱导凋亡、抗粘附转移、抑制肿瘤血管生成等多个环节发挥抗癌作用。目的：研究NCTD对人多发性骨髓瘤细胞株U266的增殖及其凋亡的影响及其作用机制。以期与化疗药同时应用，达到减少并发症，提高疾病缓解率，增强病人耐受力，延长病人的平台期，提高病人的总生存期。方法：将不同剂量NCTD作用于人骨髓瘤细胞株U266，通过检测以下指标来观察NCTD对U266细胞株的影响：1．不同剂量及时段NCTD作用后台盼蓝拒染率以明

4、确NCTD对U266细胞株的抗增殖作用，并找出实验所需NCTD的最佳剂量及最佳作用时间；2．倒置相差显微镜及光镜下分别观察NCTD作用于U266细胞前后的细胞密度、形态及结构的变化；3．流式细胞术检测NCTD作用于U266细胞前后细胞凋亡率及细胞周期来观察U266细胞株经NCTD作用后是否发生凋亡以及凋亡的初步机制。4．通过RT．PCR、免疫组化对Survivin、VEGF基因及蛋白表达进行检测，进一步探讨NCTD诱导U266细胞株凋亡的机制。结果：1．NCTD能有效地抗U266细胞株增殖，且随着药物剂量及作用时间增加抗增殖作用

5、增强，抑制率与药物剂量和作用时间呈依赖性，在40umol／L，作用48h时作用达到顶峰。2．NCTD能够诱导人多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡，光学显微镜下可见典型的凋亡改变：染色质边移、核皱缩、核碎裂、核分解。流式细胞术测得细胞凋亡率随时间剂量增加而增加，与对照组比较有显著性差异。．生文摘要一一3．流式细胞术检测细胞周期发现U266细胞经NCTD作用后细胞发生G2／M期阻滞：且倒置相差显微镜下细胞显示为哑铃型改变，提示细胞被阻滞在分裂期。4．NCTD作用于U266细胞后Survivin及VEGF的mRNA、蛋白表达均下调。结论：

6、1．NCTD能抑制U266细胞株增殖，并诱导其凋亡。细胞发生凋亡被阻滞在分裂期。2．NCTD的诱导凋亡机制可能与抑制Survivin及VEGF的表达有关。’关键词：去甲斑蝥素；多发性骨髓瘤；U266细胞系；Survivin；VEGFThestudyoftheeffectandmechanismofnorcantharidin(NCTD)on—humanmultiplemyelomacelllineU266ABSTRACTBaekground：Theincidencerateofmultiplemyelomaincreasedan

7、dpatient’sagetendtomoreyoungerwiththecomingofsocietyageingandtheimprovingofclinicaltechnology，moreandmorehaematologistpaycloseattentiontothetreatmentofmultiplemyeloma．Multiplemyelomaishematologicalmalignanttumororiginingfromplasmacyticsysteminover60yearspopulation，in

8、volvingpathologicalchangesof。blood，immunity，bones，kidneyandsoon．Traditionalchemotherapyhasaconsiderableside-effectandlowingremis．si