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1、RP-HPLC法测定Beagle犬血浆中芹菜素的浓度朱亮，李盈（浙江大学医学院附属第一医院，浙江杭州310003）[摘要]目的：建立Beagle犬血浆中芹菜素浓度的RP-HPLC测定方法。方法：Beagle犬血浆在盐酸酸性条件下，加入β-葡萄糖苷酸酶和硫酸酯酶，38℃水浴酶解1.5小时后，以乙酸乙酯提取，经HPLC分析。以甲醇-0.2%醋酸铵溶液（50:50,v/v）为流动相，经DiamonsilODSC18色谱柱分离，流速为1.0mL·min-1，柱温为25℃，336nm检测波长。结果：线性范围
2、0.673~42.8µg·mL-1，最低检测浓度为0.0837µg·mL-1；低、中、高3个浓度的绝对回收率及方法回收率均在95.65%~101.9%；日内及日间精密度均在0.9%~5.1%。结论：建立的方法灵敏、准确、重复性好，可有效测定芹菜素的血药浓度。[关键词]芹菜素；高效液相色谱法；血药浓度DeterminationofapigenininBeagledogplasmabyRP-HPLCZHULiang,LIYing(TheFirstAffiliatedHospital,Collegeof
3、Medicine,ZhejiangUniversity,Hangzhou,Zhejiang310003,China)ABSTRACT:OBJECTIVEToestablishanRP-HPLCmethodforthedeterminationofapigenininBeagledogplasma.METHODSThesampleswereincubatedwithβ-glucuronidaseandsulfatase.Thenthemixedsolutionwereextractedwitheth
4、ylacetate1.TheanalysiswasconductedwithaDiamonsilODSC18columnusingamobilephase(methanol-0.2%ammoniumacetateaqueoussolution50:50,v/v),maintainedat1.0mL·min-1at25℃.TheUVdetectorwavelengthwassetat336nm.RESULTSThelinearrangewas0.673~42.8µg·mL-1andthedetect
5、ionlimitoftheplasmawas0.0837µg·mL-1.Theaveragerecoverywas95.65%~101.9%.TheRSDsofintra-dayandinter-daywere0.9%~5.1%.CONCLUTIONThemethodissensitive,simple,accurateandrepeatable,andhasbeenappliedtodetermineapigenininBeagledogplasma.KEYWORDS:apigenin;HPLC
6、;determination芹菜素(Apigenin，图1)属于黄酮类化合物，广泛存在于水果、蔬菜、豆类、茶叶中[1]，其中芹菜含量最高。车前子、络石藤、藿香等药用植物中均含有大量芹菜素[2]。研究发现，其有抗癌、抗病毒、抗菌、抗过敏，抗血管脆性和血小板聚集及抗糖尿病并发症等多种生理活性与药理作用，对人类的肿瘤、衰老、心血管病等退行性疾病的治疗和预防有重要意义[3,4]。许多研究表明,黄酮类在肝脏二相代谢酶的作用下,可发生葡萄糖醛酸化和硫酸化反应,因此芹菜素在血浆中有部分以葡萄糖醛酸结合物和硫酸结
7、合物存在[5]。在此情况下芹菜素的含量可能会降低，影响实验[6]。本文将含药血浆酶解后再进行测定,使其葡萄糖醛酸、硫酸酯及其他结合物均能水解成游离的单体进行测定以考察其浓度更为合理。目前芹菜素的血药浓度测定和药代动力学研究尚在起步阶段，动物模型建立不多。本实验采用酶解法，建立RP-HPLC法测定Beagle犬血浆中芹菜素浓度,为芹菜素的临床研究提供参考。Apigenin(C15H10O5)M.W.270图1芹菜素的化学结构Fig1Chemicalstructureofapigenin1材料1.1仪
8、器HPLC-Agilent1100（VWD，手动进样器）；ChemStationforLC(AgilentCO.LTD)；XW-80A漩涡混合器（上海精科实业有限公司）；eppendorfCentifuge5415R(EppendorfAG22331Hamburg)。1.2试剂芹菜素对照品（Lot111K1520,SIGMA-ALDRICHCO.）；β-葡萄糖苷酸酶(IX-A,SIGMACO.)；硫酸酯酶(H-1,SIGMACO.)；甲醇（色谱纯）；醋酸铵（分析纯）；乙酸乙酯（分析
