尝试移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病

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1、1y!}05322分类号R329．2+8单位代码：10159学号：20032t021中国錾升太拳硕十学位论文题且：尝试移植骨髓问充质干细胞治疗大鼠塘尿病Traasp]antationofbonemaxTowmesenchymalstemceilspromotesfunctionalrecoveryofdiabeticrats研究生：刘弘光学科专业：垄宣皇堑芏论文课题起止时间：!喽±堡旦=兰堂主璺旦一论文完成时间：兰丛生兰旦中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得

2、的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名趣阻必靴．纱舌?6．6中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果

3、时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：，一⋯～⋯一⋯～、；、中享娑葺掉琴⋯一i尝试移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病目的近几年，各国糖尿病发病率不断上升，据2000年第17届国际糖尿病大会调查的结果显示，全世界的糖尿病患者数已超过1．51亿。临床上通常采用皮下注射胰岛素来治疗1型和部分2

4、型糖尿病，其治疗效果并不理想，且很难阻止糖尿病并发症的发生及发展。近20年来，国内外学者对胰腺移植及胰岛移植做了大量的探索。对于已经丧失胰岛细胞功能的糖尿病患者来说，植入胰岛B细胞或其替代物被认为是最有效的方法。但供者细胞来源不足及免疫排斥反应等限制了这种方法的应用。干细胞作为一类具有多向分化潜能的细胞，已经逐渐成为人们治疗糖尿病的新希望。骨髓间充质干细胞(MSC)来源广泛，取材容易，便于自体移植，且在体外长期培养过程中，始终保持其多向分化潜能，遗传背景稳定，自体移植可避免免疫排斥反应，是理想的可供移植的种子细胞。探索人

5、自身的骨髓间充质干细胞的细胞替代治疗具有广阔的应用前景，方法比较简便，而且没有伦理学和细胞来源的限制。已有研究证实MSC移植入糖尿病大鼠体内，在胰腺发现了可分泌胰岛素的移植的MSC。但也有研究者认为没有证据支持MSC在体内能分化成胰岛B细胞。在本实验中采用了新的方法，进一步验证应用骨髓间充质干细胞治疗糖尿病的可能性。我们尝试首先建立大鼠糖尿病模型，再将BrdU标记的MSC移植人大鼠体内，监测大鼠血糖和体重变化，并观察MSC在糖尿病鼠体内微环境是否能向胰岛B细胞分化，及其对糖尿病病情的恢复作用，为糖尿病治疗提供理论基础。方

6、法1大鼠MSC的分离培养和鉴定1．1无菌条件下取大鼠股骨和胫骨骨髓细胞做原代培养。1．2免疫细胞化学方法鉴定CD45，CD90的表达情况。2大鼠糖尿病模型的建立2．1一次性腹腔注射链佐霉素建立大鼠糖尿病模型。2．2监测大鼠血糖以确定建模是否成功。2．3用免疫荧光方法(Insulin抗体)检测胰腺冰冻切片。3尾静脉注射移植经过BrdU标记的MSC3．1用BrdU标记MSC。3．2尾静脉注射移植MSC。4移植后疗效的检测4．1监测血糖和体重变化。4．2取胰腺切片，免疫荧光方法检测移植进受体的MSC能否在胰腺存活及其是否表达I

7、nsulin。结果1分离培养鉴定了大鼠骨髓间充质干细胞，免疫组化CD45(一)、CD90(+)。．细胞的纯化均一程度达到80％。2建立了大鼠糖尿病模型，其血糖稳定>6．7mmol／L。3经MSC移植的糖尿病大鼠血糖有所下降，但仍高于正常水平，体重上升。在接受MSC移植的大鼠胰腺内发现大量外源性MSC，大部分在胰腺内增殖旺盛，并有少量MSC进入胰岛。结论MSC移植对大鼠糖尿病有一定的治疗作用。关键词骨髓间充质干细胞；糖尿病；胰岛素；移植·2·(：j匦：=：)TranspIantationofbonemarrowmesenc

8、hymalstemcellspromotesfunctionalrecoveryofdiabeticratsAbstractPurposeIslettransplantationasapotentialtreatmentfordiabeteshasbeeninvestiga—tedextensivelyoverthe