戴安公司戴安hplc液相色谱基础(ppt)

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1、液相色谱基础知识戴安中国HPLC销售培训2005年关于色谱色谱是一种分离工具，而不是传统意义上的分析仪器常见的分离方式：蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤等等色谱是其中一种分离工具色谱法简介色谱法（Chromatography）溯源俄国科学加1903年发现色谱的吸附原理，开创了应用吸附原理分离植物色素的新方法并见诸于俄文的文献1906年正式命名（见诸文献）色谱法；Chromatography30年代开始广泛研究和应用主要是气相色谱及薄层色谱高效液相色谱法的广泛应用始于70年代色谱的发明人俄国科学家：M.S.T

2、swett正式命名“色谱”的文献色谱分离的机理分离是一个物理的过程流动相（MobilePhase）固定相（StationaryPhase）样品（溶解于流动相中的溶质）什么是液相色谱气相色谱：流动相是气相液相色谱：流动相是液相什么是高效液相色谱HighPerformanceLiquidChromatography高效液相色谱法，简称：HPLC是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高效能分离手段：高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器……广泛应用于各个领域：医药/环保/石化/生命科学/

3、食品及农业……在技术，理论及应用上仍处于发展阶段HPLC的仪器配置及流程溶剂色谱泵自动进样器HPLC色谱柱检测器废液数据处理系统HPLC的仪器配置及流程色谱泵自动进样器色谱柱及柱温箱检测器数据处理系统溶剂色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。←色谱峰保留时间（分）基线↓峰高峰宽响应值液相色谱图相关术语色谱峰－Peak色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线峰底－PeakBase峰

4、的起点与终点之间连接的直线峰高－PeakHeight峰最大值到峰底的距离峰宽－PeakWidth在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离半（高）峰宽－PeakWidthatHalfHeight通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离液相色谱图相关术语峰面积－PeakArea峰与峰底之间的面积,又称响应值标准偏差；σ－StandardError0.607倍峰高处所对应峰宽的一半拖尾峰－TailingPeak后沿较前沿平缓的不对称峰前伸峰－LeadingPeak前沿较后沿平缓的不

5、对称峰鬼峰－GhostPeak并非由试样所产生的峰；亦称假峰液相色谱图相关术语基线－Baseline在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线基线飘移－BaselineDrift基线随时间定向的缓慢变化基线噪声；N－BaselineNoise由各种因素所引起的基线波动谱带扩展－BandBroadening由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象液相色谱图相关术语死时间，t0－Deadtime不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间保留时间，tR

6、－Retentiontime组分从进样到出现峰最大值所需的时间死体积，V0－Deadvolume不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积保留体积，VR－Retentionvolume组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积液相色谱应用：制备型液相色谱分离及纯化样品是液相色谱原理的直接利用对分离及纯化的要求化合物的稳定性样品的复杂性制备量的要求纯度的要求，及纯度的鉴定方法的安全性色谱方法转换如果没有与文献或要求相近的色谱柱转换进样量转换流速液相色谱应用：分析型液相色谱定量分析主要基于与标

7、准品的比较是其最大应用领域定性分析；不是色谱的强项基于样品的保留时间比较借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器对定量及定性分析的要求灵敏度、精度及准确度的要求样品量的要求；复杂样品的分析能力容易使用液相色谱原理－基本概念及方法开发液相色谱实验所需的基本参数流动相：种类及配比，等度或梯度固定相：色谱柱类型及内径、长短流动相输送系统参数：流速检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等温度控制进样量以上参数即构成一个具体的HPLC方法；亦称色谱条件评价液相色谱方法的标准问题：什么样的分离结果是好的？分离度？什么是色谱

8、的分离度分离度的公式：R：分离程度的量度影响分离度的因素：K’、α及N分离度方程：K‘是容量因子，表达了被分离组分与柱填料之间作用的强弱α是分离因子，描述两个被分离组份分离的好坏程度，是化学因素N是理论塔板数，描述色谱峰谱带展宽的程度若N增加2倍或3倍,R会如何变化?分离度方程解析：柱效项N＝理论塔板数：分离效率的量度PW=.5PW=2色谱柱的柱效N理论塔板数计算公式：Ws方法Wtan16切线法Wh5.54半峰高W3s93sW4s164sW