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时间:2019-02-27
《nr4a2基因在胃癌侵袭转移中作用及其机制的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、第二军医大学硕士学位论文NR4A2基因在胃癌侵袭转移中的作用及其机制研究姓名:刘小康申请学位级别:硕士专业:外科学指导教师:马立业20090501NR4A2基因在胃癌侵袭转移中的作用及其机制研究摘要【目的】检测胃癌(GC)中NR4A2基因表达水平,从NR4A2表达调控机制出发筛选新的选择性剪接异构体,进一步检测异构体在胃癌中的表达。探讨NR4A2及其异构体与GC发生和转移的关系。【方法】l、采用实验室前期cDNA基因表达谱:卷片(GEO:GSM253487toGSM253498)分析结果,利用生物信息学方法筛选出胃癌转移相关新基因NR4A2,采用RT-PCR,re
2、al-timePCR检测28例手术切除的胃癌原发组织、癌旁正常组织和转移灶组织中NR4A2mRNA的表达,免疫组化检测23例组织样本NR4A2蛋白表达。2.从NR4A2基因调控机制出发,通过选择性剪接数据库(AlternativeSplicingDatabase,ASD)对基因NR4A2可能存在的选择性剪接异构体进行预测,半定量RT-PCR检测胃癌样本中预测异构体的表达情况。PCR产物凝胶回收,T载体连接,经a筛选后转染DH5Q感受态细胞,菌液送测序,应用计算机软件进行测定序列的比对分析。经验证从组织中扩增的产物与生物信息学预测结果一致,确认为新的选择性剪接异构体
3、。3.选择28例配对样本,采用real—timePCR检测新剪接异构体在胃癌组织样本中的表达。【结果】同癌旁组织比较,NA4A2在20对原发胃癌组织中呈现低表达,P=:0.017:同原发癌组织比较,NA4A2在8对胃癌肝转移样本中呈现低表达,P值为:0.001。采用Envision免疫组化方法检测NR4A2蛋白表达,无统计学意义(X2=1.543,P=O.672),但阳性率趋势同real-timePCR一致。发现2种新的剪切异构体NR4A2-I和NR4A-II,real—timePCR检测表明同癌旁组织相比较两种异构体在胃癌原发灶中表达下调(P=0.007,0.0
4、18);同原发癌组织比较两种异构体在转移灶表达下调(P=O.004,0.016)。。+【结论】NR4A2基因的表达水平与GC的转移密切相关。确定NR4A2存在2种剪接异构体,证实其表达水平同胃癌转移相关,其异构体是影响该基因表达水平的主要原因。为确定胃癌新的转移及预后判断肿瘤标记物提供了理论依据,可能成为肿瘤的治疗提供新的途径。【关键词】NR4A2;Nurrl;胃癌;转移;剪接异构体第二军医大学硕士学位论文Abstract[Objective]TodetectexpressionofNR4A2geneingastriccarcinoma(GC).Toidentif
5、ysplicevariantsofNR4A2andinvestigatethemRNAexpressionofsplicevariantsingastriccarcinomatissues.Finally,todeterminetherelationshipbetweentheexpressionofNR4A2andsplicevariantsonmetastasisandoncogenesisofGC.[Method]cDNAmicroarray(GEO:GSM253487toGSM253498)techniquewasusedtodetectthediffer
6、entiallyexpressedgenes.AfterscreeningwithDNAmicroarray,NR4A2geneWasdown-regulatedinmetastasisGC.TheexpressionesofNR4A2mRNAswhichwereextractedfromhumangastriccancertissues(GC),paracarcinomagastricmucosatissuesandmetastasisof28patientsweredetectedbyRT.—-PCR,real-timePCR.Theproteinexpres
7、sionofNR4A2wasdetectedbyimmunohistochemisty(IHC)in23cases.AlternativeSplicingDatabaseWasusedtopredictthesplicevariantsofNR4A2.Usingthespecificprimersets,thesplicevariantswereidentifiedinmetastatictissues,primaryGeandnormaltissuesadjacenttocanoe.ThevariantswereamplifiedbyRT-PCR,andwere
8、clone
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