内含特定rna的ms2病毒样颗粒的原核和真核表达及应用研究

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1、博士学位论文学校代码：10023学号：B2009456内含特定RNA的MS2病毒样颗粒的原核和真核表达及应用研究所院：学科专业：姓名：指导教师：导师小组：完成日期：卫生部临床检验中心临床检验诊断学宋利琼李金明研究员王露楠研究员二O一二年五月：i匕京协和医学院婚士学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位沦文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外．不包岔其f也A已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或汪书而使用过的材料。与我一同工作

2、的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解jE塞坯塑医堂陵有关保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交沦文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权j鳖塞蛰塑医堂医可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：学位论文作者

3、毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：北京切用i医学院博士学位论文英文缩略词中文摘要·．英文摘要·．目录l，．)6第一暗B分内含手足口病毒(HFMV)RNA的MS2病毒样颗粒(VLPs)的原核表达及其作为病毒核酸检测室阉质量评价(EOA)样本的应用研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．91．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10}．i．实验材料和试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101．2．

4、力‘法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．151．2．1．pACYC—MS2一PDs原核表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151．2．2．pACYC—MS2一PDsVLPs的表达和纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．241。2．3．VLPs的RT-PCR验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．251．2．4．VI．Ps的电镜观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．2．5．VLPs定量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26】

5、．2．6．VLPs临床验证试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．2．7．两种介质的VLPs的Ct值比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．271．2．8．以VLPs作为质控样本的EQA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．271．2．9．统计学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．292．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．1．pACYC—MS2一PDs的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．292．2．内含PDs嵌

6、合体RNA的VLPs的表达、纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．322．3．VLPs电镜结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯342．4．VLPs的RT-PCR验证结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯352．5．VLPs作为质控晶或标准品的临床验证结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯352．6．商业试剂盒验证VLPs包装片段结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．402．7．VLPs在两种不同介质中的Ct值比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．422．8．EQA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．433．讨论⋯····⋯⋯··⋯．．--⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．，⋯．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯．．⋯．⋯⋯⋯．49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50第二部分内含癌胚抗原(CEA)一InRNA的MS2VLPs的真核表达及其作为结直肠癌治疗性疫苗的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55】．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57

8、1．1．实验材料和试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．57北京协和医学院博士学位论文】．2．厅法⋯⋯··⋯·⋯⋯．·⋯⋯．⋯．．⋯．．⋯．⋯．．⋯．．．．⋯．．⋯．．．⋯．．⋯．．⋯⋯⋯．．67j．2．1．pMS2一CEA酿酒酵母表达载镕的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯671．2．2．pMS2一CEAVLPs的表达及分离纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯731．2．3．pMS2一CEAVLPs的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．77112．4．pMS2一CEAVLP