白蜡虫多糖分离纯化与抗氧化、免疫活性研究

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1、中国肄耋斜学斫宪院学位论文学位论文作者指导老师姓名申请学位级别专业名称研究方向论文答辩日期何钊冯颖研究员博士森林保护学药用昆虫与昆虫生化2014年6月@中国·北京DissertationfortheDegreeAntioxidantandImmunomodulatoryActivitiesof．．PolysaccharideIsolatedfromWhit——eWa——xS——————c————a—．．——l———e———．．—Candidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExaminati

2、on：Degree-Conferring-Institution：HeZhaoProf．FengYingDoctorForestProtectionJune，2014ChineseAcademyofForestry独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：f彳弘日期：加f许‘月J

3、6日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研究院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权中国林业科学研究院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：d睁cF年‘月吐6日导师签名：玛勿．矽7中年占月影日学位论文作者毕业联系方式工作单位：中国林业科学研究院资源昆虫研究所联系电话：0871．63861234电子邮件：he吐ao@163．corn通讯地址、邮

4、编：云南省昆明市白龙寺中国林业科学研究院资源昆虫研究所，650224摘要白蜡虫(EriceruspelaChavanncss)属同翅目(Homoptera)蜡蚧科(Coccidale)，是中国传统资源昆虫，雄虫分泌的白蜡广泛应用于食品、医药等行业。在传统白蜡生产中，雄虫生产白蜡，大量怀卵的雌虫除用于繁殖后代外，未得到充分利用。近年来研究发现白蜡虫雌成虫含有丰富的蛋白质等成分，营养丰富、食用安全，动物试验表明具有明显的免疫调节和抗突变功能，其中多糖类物质可能是其功效成分之一。本文以白蜡虫雌成虫为原料，采用大孔吸附树脂对水体醇沉得到粗多糖(wps)进行脱色、脱蛋白，对脱色后多糖(d

5、wps)进行离子交换层析，最后通过Sephacyl$300和Superdex200两次凝胶层析对离子交换层析的中性多糖组分进行分离，得到两种具有相对均一分子量的多糖组分(wlslsup、wls2sup)。对两种纯化多糖进行结构鉴定，并对白蜡虫粗多糖及纯化多糖进行体外抗氧化、巨噬细胞免疫增强及小鼠体内免疫调节功能进行了研究，表明白蜡虫多糖具有抗氧化及免疫调节功能。主要研究结果如下：(1)白蜡虫多糖分离纯化：采用大孔吸附树脂对水提醇沉提取白蜡虫多糖进行脱色，静态吸附法筛选12种树脂、比较不同吸附条件下树脂的脱色率、脱蛋白率及多糖保留率，确定了NKA．9树脂为白蜡虫水溶性多糖合适的脱

6、色树脂；动态吸附法确定脱色条件为30‘C下将1倍床层体积10mg／rrlLpH8．0的白蜡虫多糖溶液以1BV／h流速上样，然后以5BV体积的去离子水洗脱，收集洗脱液浓缩干燥后得到脱色白蜡虫多糖，在此条件下其脱色率为71．4％、多糖收率60．O％，脱蛋白率51．9％。对脱色后的白蜡虫多糖进行DEAE离子交换层析、选择Sephacyl$300和Superdex200凝胶两步层析，分离得到两个白蜡虫纯化中性多糖组分wlslsup和wls2sup。其中wlslsup、wls2sup多糖含量分别为84．3％及95．3％。(2)白蜡虫多糖结构鉴定：高效凝胶色谱测定wlslsup、wls2s

7、up分子量为24．1和20．1kDa；柱前衍生．毛细管电泳测定多糖wlslsup的单糖组成为半乳糖：甘露糖：葡萄糖=10．8：10：l：wls2sup的单糖组成为半乳糖：甘露糖=1．36：1；红外光谱及核磁共振显示纯化多糖含吡喃型甘露糖或半乳糖。wlslsup、wls2sup分别具有5和3种单糖残基，分子内均有a、B两种类型糖苷键。(3)白蜡虫多糖的抗氧化活性：采用抗氧化能力指数、铁离子还原能力、清除ABTS自由基、羟自由基及超氧阴离子能力以及对过氧化氢损伤细胞保护评价方法，对白蜡虫多糖组分