列当高效生防菌的筛选及其防治机理研究

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1、分类号：密级：学号：2009107067单位代码：10759石河子大学硕士学位论文列当高效生防菌的筛选及其防治机理研究学位申请人丁丽丽指导教师赵思峰教授申请学位类别农学硕士专业名称植物病理学绿洲农业微生态多样性与研究方向生物防治所在学院农学院中国·新疆·石河子2012年6月ThescreeningofcontrolOrobanchestrainanditscontrolmechanismstudyADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequire

2、mentsFortheDegreeofMasterofAgricultureByDingLi-li(PlantPathology)DissertationSupervisor:associateprof.ZhaoSi-feng石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授

3、权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目的：寄生性杂草列当在新疆很多地区均有发生，给当地哈密瓜、加工番茄、向日葵、打瓜等重要经济作物造成严重损失。为了防治列当危害，筛选出对列当强致病的生防菌株并明确其防治机理，为列当的有效防治提供技术

4、支持。方法：本研究从新疆列当发生区采集地上部萎蔫、茎基部变色及自然死亡的列当病样进行了采集、分离和初步鉴定，为新疆列当生物防治提供菌种来源。通过离体接种、盆栽试验、小区试验和大田试验测定致病菌对列当的防治效果；并采用形态学和分子生物学方法对致病性较强的菌株进行了鉴定，并对其进行单因素筛选和发酵工艺优化的研究；对生防菌株毒素的提取和初步鉴定，采用了高效液相色谱法和气相色谱-质谱（GC-MS）方法分析，明确高效生防菌的除草活性物质。结果:1、采集了1000株列当病样，通过分离共获得526个分离物。在526个分离物中，镰刀菌294个，占分离总数的

5、55.89%；丝核菌153个，占29.09%；腐霉菌45个，占8.56%；其他34个，占6.46%。镰刀菌、丝核菌、腐霉菌是新疆地区列当的主要致病菌。经过离体接种得出引起列当的发病最强的是腐霉菌，其次是镰刀菌，最弱的是丝核菌。通过盆栽试验和小区试验结果分析得出8株致病性较强的致病菌，即4株腐霉菌HN4-0、HN2-0、HN12930B和FU-0和4株镰刀菌KS7-2、KS3-3、KT-10和BT1883c。其中腐霉菌HN4-0的致病力最强，HN2-0和FU-0次之，HN12930B的致病力相对较弱；镰刀菌KS7-2和KS3-3的致病力强，K

6、T-10和BT1883c的致病力相对较弱。2、通过3株腐霉菌的生物学特性、菌落形态特征及藏卵器、雄器和孢子囊的形态检测，并参照余永年编写对腐霉菌的描述初步确定菌株HN4-0和HN2-0为瓜果腐霉，FU-0为终极腐霉。通过4株镰刀菌的菌落形态、大小孢子形态及产孢方式、厚垣孢子的形态特征，并参照王拱辰的方法初步确定KS7-2和KS3-3为茄病镰孢，KT-10为尖孢镰孢，BT1883c为F.cerealis。并采用18SrDNA的ITS区序列分析，与形态学鉴定结果相同。3、通过对生防菌株HN4-0进行单因素筛选和发酵工艺优化的研究，明确了其生长最

7、适碳源是玉米粉，最适氮源是豆粕，最适培养温度是28℃，最适pH值范围为7.0。对生防菌株HN4-0毒素的提取和初步鉴定，采用了高效液相色谱法和气相色谱-质谱（GC-MS）方法分析，明确了HN4-0的除草活性物质为邻苯二甲酸二甲酯。通过对除草活性物质对列当抑制性的测定及最适稀释浓度的筛选，明确了生防菌HN4-0防治列当的机制。结论：筛选出高效生防菌株腐霉菌HN4-0，通过形态学特征观察和18SrDNA分析鉴定其为瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum。通过单因素筛选和发酵工艺优化，得出最适碳源（玉米粉）为35.31g/100mL，

8、pH值为7.91，培养温度为28.11℃时，最大的发酵产量预测值达到1.377g/100mL。通过高效液相色谱法和气相色谱-质谱法分析生防菌HN4-0乙酸乙酯相提取液的除草活性物