胚胎干细胞诱导分化为大脑皮质谷氨酸能神经元的实验研究

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1、橇翌大学万方数据硕士学位论文胚胎干细胞诱导分化为大脑皮质谷氨酸能神经元的实验研究Studyondirecteddifferentiationofcortical91uta腿tergicneuronsfrommouseembryonicstemcellsinVitro院系：专业：姓名：指导教师：华山医院外科学沈亦雯朱剑虹教授完成日期：2014年4月8日万方数据主要英文缩略词表⋯一⋯⋯中文摘要⋯⋯⋯⋯～⋯一一前言目录研究内容一一一一一⋯一⋯⋯材料与方法～一一一⋯一l材料～一一一一一一1．1主要试剂⋯⋯⋯一一1．2主要动物1．3主要仪器一一一删删Ⅲ⋯洲1帅㈣圳Ⅷ㈣Y286

2、4

3、『!I2金⋯⋯一⋯一一一一一一一10一一一一一一⋯～⋯一一1O一一101．4主要溶液配带0一一一一一一一一一一一2方法⋯～一一2．1PMEF细胞的分离培养一一一一一一一一132．2饲养层的带0备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一一一⋯⋯⋯⋯一一一162．3囊胚的获得和培养⋯一一一⋯一一一一一一一一一一162．4内细胞团(ICM)的分离一一一一一⋯一⋯一⋯⋯一一一162．5mESCs的消化和培养⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯一一一一162．6mESCs的AKP舅乏色一一一⋯一⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯一一162．7mESCs的表面抗原SSEA—l鉴定一一一一一一一2．8优化SFEB培养法一一2．9细胞标

4、志性基因表达检测一172．10免疫荧光染色定向分化的神经细胞一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一一一192．1l衫葱式细胞术分选目的细胞一一一一～⋯⋯⋯一一一一202．12膜片钳技术检测VGLUTl+细胞的电生理特性⋯⋯一一一一一202．13VGLUTl+神经元细胞移植⋯⋯一一一⋯⋯⋯⋯一一一一一202．14荧光镜检VGLUTl+细胞在脑内的位置⋯⋯⋯一一一一202．15膜片钳技术检测VGLUTl+细胞在小鼠脑内的电生理特性⋯⋯⋯一212．16约℃计学方法一⋯⋯～一一一⋯⋯一一一⋯⋯一一一22万方数据结果⋯⋯一⋯⋯⋯⋯一一一⋯1．分离培养得到胚胎干细胞～一一232．优化SFEB法：高

5、效诱导胚胎干细胞向端脑皮质前体细胞分化⋯～⋯253．环巴胺可使端脑前体细胞选择分化为皮质谷氨酸能神经元⋯⋯⋯～274．优化法生成的VGLUT1+细胞具有类似成熟神经元的电生理特性一一一295．体内移植后的VGLUTl+神经元具有谷氨酸能神经元的电生理特性⋯一30讨韧≥⋯一一⋯⋯⋯一结论与展望参考文献综述——一一⋯一一中文摘要一一⋯Abstract～一⋯39垂参j号文献一～一一一～⋯⋯～一一一⋯⋯⋯一⋯一一一一44骞紊j苤二⋯一一⋯⋯⋯一一一一一～⋯⋯⋯一⋯一一一一51中文摘要⋯⋯一一一参考文献～一一一⋯一⋯一一⋯⋯51⋯⋯～一一61附录一一⋯一一一⋯⋯⋯一一一⋯⋯～

6、一一一致谢一一⋯一一一64万方数据主要英文缩略词表英文缩写英文全名中文全名ADAlzheimer’sdisease阿尔兹海默病PDParkinson’sdisease帕金森病PGCsPrimordialgermcells原始生殖细胞EGCsEmbryonicgermcells胚胎生殖细胞ESCsEmbryonicstemcells胚胎干细胞mESCsMouseembryonicstemcells小鼠胚胎干细胞ICM工nnercellmass内细胞团VGLUTsVesicularglutamatetransporters囊泡谷氨酸转运体PMSGPregnantmare

7、serumgonadotropin孕马血清促性腺激素HCGhumanChorionicgonadotrop(h)in人绒毛膜促性腺激素GFAPGlialfibrillaryacidicprotein胶质纤维酸性蛋白0ct3／40ctamermotif3／4PoU转录因子家族成员SSEA—lStage—specificembryonicantigen一1阶段特异性胚胎抗原一lBfl(FoxGl)ForkheadboxproteinG1叉头框蛋白G1TujlclassⅡIp—tubulinp一微管蛋白IⅡNestin巢蛋白bFGFbasicFibroblastgrowt

8、hfactor碱性成纤维细胞生长因子LIFLeukemiainhibitoryfactor白血病抑制因子DMEMDulbecco’smodifiedeaglemediumDulbecco改良Eagle培养基DMEM／F12Dulbecco’smodifiedeaglemedium：nutrientDulbecco改良Eagle培养基：mixtureF12营养混合物／F12G—MEMG—MinimumEssentialMediumMEM培养基NE从Nonessentialaminoacid非必需氨基酸DMS0Dimethylsulfoxide二甲基亚砜p—MEp—