杏仁核点燃大鼠癫痫持续状态后海马mirna表达谱与神经元凋亡的相关性研究

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1、万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·3符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“5前言⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯··6刖舌⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”18讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·21结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··26附图表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··27参考文献⋯⋯⋯⋯“·⋯⋯⋯·36综述····⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯”······⋯⋯⋯··⋯⋯一⋯”·-”⋯·：··⋯一·⋯···⋯⋯⋯··⋯“⋯···”⋯·42致谢⋯⋯·⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯·⋯⋯·一··n⋯⋯⋯⋯”·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯”⋯⋯⋯

3、⋯57攻读学位期间发表论文目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·58原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·59万方数据泰山医学院硕士学位论文杏仁核点燃大鼠癫痫持续状态后海马miRNA表达谱与神经元凋亡的相关性研究研究生：孙臻专业：老年医学导师：谭兰教授中文摘要目的癫痫是中枢神经系统常见病，目前影响着全球O．5％～1％的人群。选择性神经元死亡和苔藓纤维芽生等病理生理过程与癫痫的发生及发展有关。micmRNA(miRNA)是一类内源性的具有调控功能的非编码小RNA，它通过诱导沉默复

4、合体形成来降解靶mRNA，或者阻遏靶mRNA的翻译。最近越来越多的文献报道，miRNA在中枢神经系统疾病的发生发展中发挥着极为重要的作用。本实验通过建立杏仁核点燃癫痫持续状态模型的动物实验来探讨海马ndRNA表达谱的变化，并且对癫痫持续状态后差异表达的miRNA与海马神经元凋亡的关系进行了评估。研究方法1、首先选用6~8周龄健康雄性SD大鼠，建立杏仁核点燃大鼠癫痫持续状态模型，于造模成功后24小时提取大鼠脑组织海马区miRNA，采用高通量测序技术研究癫痫持续状态后大鼠海马区脑组织与正常大鼠海马区脑组织中miRNA表达谱的差异。2

5、、随后将筛选出的差异表达明显的6个miRNA用实时荧光定量聚合酶链式反应(RcalqimeQuantitaliveReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction,qRT-PCR)进行验证。3、应用靶基因预测软件(RNAhybrid和miRand)对以上6个miRNA的目的候选靶mRNA进行了预测，并使用KEGG(KyotoEncyclopediaofGenesandQ埴贼n懿)进行通路分析。4、最后检测此6个miRNA在癫痫持续状态后不同时间点(4小时，24小时，l周和3周)的动态变化，与

6、此同时应用Nissel染色和TUNEL(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPend-labelingassay)染色检测癫痫持续状态后不同时间点海马神经元生存和凋亡情况，进一步评估筛选出的miRNA是否与癫痫持续状态后神经元凋1万方数据泰山医学院硕士学位论文亡有关。结果l、杏仁核点燃癫痫持续状态大鼠和对照组证常大鼠海马组织差异表达的miRNA：在癫痫持续状态后24小时检测出差异表达的miRNA共37个，其中上调的miRNA有34个，下调的有3个。进一步筛选出在癫痫持续状

7、态后变化大于2倍的(P<0．01且P≠0)6个miRNA(miR-874-3p，miR-20a-5p，miR-345—3p，miR-365—5p，miR-764—3pandmiR-99b-3p)，在以上6个筛选出的miRNA中，上调的miRNA表达差异最大的是miR-879．5p(4．177倍)，差异最小的是miR-764-3p(2．078倍)，下调大于2倍的是miR-99b-3p。2、采用qRT-PCR对结果进行验证：将筛选出的变化明显的6个miRNA进行qRT-PCR验证，miR-974--3p,miR-20a-5p，miR

8、-345—3p，miR-365—5p，miR-764-3p的表达量与正常对照组相比明显增高，而miR-99b-3p的表达量明显下降，此与高通量测序结果一致。3、靶基因预测：利用RNAhybrid和miRand两个靶基因预测软件对筛选出的6个miRNA的靶mRNA