神农香菊diamyb基因克隆及功能分析

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1、万方数据学校代码：10225学号：S14010学位论文神农香菊刃／蒯熘基因克隆及功能分析指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：授予学位单位：高耀辉何淼副教授硕士2014年6月东北林业大学学科专业：园林植物与观赏园艺论文答辩日期：2014年6月4日授予学位日期：2014年6月答辩委员会主席：论文评阅人：春夕厶符蒜大学万方数据Univers埘Code：10225RegisterCode：S14010删㈣删㈣㈣㈣Y2723007DissertationfortheDe掣eeofMasterCloningandf．unctionalanalysisofD矗I膨】豳譬inT、■．■●■■

2、』■JUP以口朋以Z以PJ"口Z刀口ZCMJ矩Var．口加聊口以C“力ZCandidate：SuperVisor：AcademicDegreeAppHedfor：Sp宅ciality：DateoforalExamiⅡation：University：GaoYjaohuiAssociateProf．HeMiaoMaster0m锄ent“PlantandHorticultureJune．2014NortheastForestryUniVersity万方数据摘要神农香菊∞册砒，2旃emⅡ融c“研vaL口rom鳓fc甜m)是菊科菊属中有一种新资源植物，其花、叶及根均具有浓郁的香气，为菊属植

3、物中罕见的具有浓郁香味的种。植物的香味物质通常含有几种化学成分，是由多种酶调节生物合成途径所产生，因此香味成分的含量受相关酶基因的限制。然而，转录因子基因表达的改变通常会导致植物的剧烈变化，膨髓基因香味成分的次生代谢物有关。因此，开展神农香菊芳香物质相关代谢相关的基因工程研究对改良重要的观赏植物菊花的花香性状，培育优良的菊花新品种具有十分重要的意义。研究的结果如下：1．本研究以引自湖北神农架的神农香菊幼苗叶片总I矾A为模板，通过R．T-PCR方法扩增得到一个1300bD的MYB类转录因子基因，将其命名为Dj栅，利用生物信息学方法对D脚基因编码的氨基酸序列进行分析，结果表明该基因序列

4、全长948bp，开放阅读框编码315个氨基酸，分子量为34．57，等电点为9．04，具有两个MYB结构域，是一个典型的R2R3MⅦ转录因子。通过NCBI网站的BLAST发现该基因与菊花肘功2基因有着高度同源性(95％)，推测其功能也相似，为与激素应答有关。2．构建植物表达载体PCAMBIAl30l—M绉，采用农杆菌侵染方法将神农香菊D㈣基因的植物表达载体转入拟南芥中，对转基因拟南芥进行潮霉素筛选，共筛选出D胁^彻6个转基因株系，通过对转基因拟南芥进行R1乙PCR检测，表明神农香菊觑删基因成功转入拟南芥。3．在显微镜下观察发现，MYB转基因拟南芥的表皮毛数量与野生型拟南芥相比明显的降

5、低。同一视野范围内含有Df洲阿基因的拟南芥表皮毛数量相对较少，选取了10个视野范围进行数量的差异统计分析，表明在转基因拟南芥叶片正面分布着极少数表皮毛，而在背面却没有，这与野生型拟南芥有很大的不同。因此，该现象的产生可能与Di枷转录因子基因的过量表达抑制了植株表皮毛形成或者形态建成，进一步说明了D枷基因与表皮毛的形成有关。关键词神农香菊；M瑚转录因子；基因克隆；生物信息学；基因转化万方数据AbsnjactAbstract上)P，z西位疗珐P刀埘伽妣ⅣmVar．口，om口菇c“misaherbaceousperemlialplantchamcterizedbyspecialscem，

6、wIlichistheimponantaromaresourceingenusDendrathemaandfoundinShe如on西通HuBeiproV沁e，P．R．China．nlenavormatterinplalltsusuallyconsistSofseVeralche血calco埘【ponents，whosepa也wayofthebioSyntllesisisregulatedbym锄yenzymes，soitisrestrictedto011lyincllea∞numbersofc叩iesofkeyenzymes’genes．Whereas，alte姐：tionint

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