荧光实时定量pcr检测线粒体dna氧化损伤方法初探

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1、·_。——320‘_——ChinJLabDia1，March，2010，V0j14，No．3[7]EddyAA，FogoAB．PlasminogenActivatorInhibitor-1inChronicKidneyl9]MatsumotoS，TakebayashiK，AsoY．Theeffectofspironolactoneoncircu．Disease：EvidenceandMechanismsofActionlJJ．JAmSocNeplu'ol，1aingadipocytokinesinpatientswithtype2diabetesmellituscomplicate

2、d2006，17(11)：2999．bydiabeticnephropathy[J]．Metabolism，2006，55(12)：1645．[8]FujisawaG，OkadaK，MutoS，eta1．Spironolactonepreventsearlyrenal[10]GloriosoN，FilighedduF，ParpagliaPP，eta1．1lbeta—Hydroxysteroidde-injuryinstreptozotocin·induceddiabeticrats[J]．KidneyInt，2004，66hydrogenasetype2activityisasso

3、ciatedwithleftventricularmassines-(4)：1493．sentialhypertension[Jj．EurHeartJ，20O5，26(5)：498．(收稿日期：2009—03—20)文章编号：1007—4287(2010)03—0320—05荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤方法初探孙玉，张洪海，柳雅立，石英，魏飞力，吴昊，陈德喜(首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室，北京100069)摘要：目的体外构建DNA氧化损伤模型，荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤。方法体外应用亚甲蓝联合可见光(MBL)方法建立DNA氧化损伤模型，

4、通过8一羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)特异性切割氧化损伤位点8一羟基鸟嘌呤(8一oxoG)，运用荧光实时定量PCR法检测不同比例混匀的OGG1酶切与未酶切的DNA氧化损伤模板。结果成功构建体外氧化损伤DNA模型，OGG1酶能特异切割氧化损伤位点；OGG1酶切DNA在定量PCR体系模板中所占比例，与线粒体DNA编码基因CO1／扩增ct值呈正相关。结论自制OGG1酶具有良好的生物活性，可以联合荧光实时定量PCR检测DNA氧化损伤。关键词：线粒体DNA；氧化损伤；荧光实时定量PCR中图分类号：R392．1文献标识码：ADeterminationofoxidativemitochond

5、rialDNAdalnage、viu1Real-TinlePCRSUNYu，ZHANGHong-hai，E，Ya-li，eta1．(ResearchlaboratoryofSTDandAIDS，8eiji~gYouAnHospital，CapitalUniversityofMedicalScience，Beijing100069，China)Abstract：ObjectiveToconstructthemodelofoxidativeDNAdamageinvitro，usingreal—timePCRtomeasI1Feoxidativemito—chondri~DNAdamag

6、e．MethodsTheplasmidwastreatedinvitrowithMethylenebluepluslight(MBL)toconstructthemodelofoxidativeDNAdamage．TheoxidativeDNAwassubjectedto8-oxoguanineDNAglycosydase(OGG1)digestiontoeonfiriTltheforma—tionof8-oxoguanlne(8-oxoG)．Real—TimePCRwasusedtomeasurediferentpercentofsamplesdigestedbyOGGI．Res

7、ultsAshe．cessfl1]modelofoxidativeDNAdamagehadbeenconstructed；OGGICalldigestspecificoxidativedamagesite．Thes~ongcorrelationwasfoundbetweenthepercentofsamplesdigestedbyOGG1andaveragecyclesamplifiedbyReal—TimePCR．ConclusionOGG1madebyOllrse