蓝萼甲素在神经胶质瘤细胞抑制作用及其机制研究

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1、万方数据苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明瓢用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不合为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：刍睦：Et期：：垫!生!!：垄万方数据苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电

2、子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)．电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年一月解密后适用本规定。非涉密论]℃酉论文作者签名：导师签名：期：垫f竺：!L姿期：卫删万方数据蓝萼甲素对神经胶质瘤细胞抑制作用及其机镧研究中文摘要目的：观察蓝萼甲素(

3、Glaucocalyxin八GLA)诱导胶质瘤细胞凋亡的作用，以及对胶质瘤微环境的影响并探讨其作用机制。方法：用MTT，细胞实时分析仪检测细胞增殖和细胞迁移；显微镜观察细胞形态学变化；平板克隆实验检测集落形成的能力；形态学观察、流式细胞术(Flowcytometry,FCM)检测细胞凋亡，细胞周期以及线粒体膜电位变化；利用稳定同位素标记技术(Stableisotopelabelingwithaminoacidsincellculture，SILAC)定量蛋白组学方法寻找潜在靶点；利用干扰RNA、PCR、Westernbl

4、ot技术检测并验证化合物诱导细胞凋亡分子信号机制；用神经胶质瘤培养上清或白细胞介素一10(Interleukin一10，IL．10)处理BV02小胶质细胞模拟神经胶质瘤相关巨噬细胞／4,胶质细胞并且检测化合物对肿瘤相关小胶质细胞M2转化作用及其分子机制。结果：1．GLA能显著抑制C6、GL261、U251、U87MG、T98G5株胶质瘤细胞生长且呈现剂量依赖性，IC50分别为15．03士1．44¨M(C6细胞)，14．144-1．35gM(GL261细胞)，12．424-0．68pM(13251细胞)，18．49a：1．

5、36州(US7MG细胞)，44．32士1．92gM(T98G细胞)；较低浓度的GLA能显著抑制C6细胞集落形成；GLA引起C6细胞变圆、脱落、染色质凝缩、核碎裂；GLA剂量依赖性的诱导C6细胞凋亡并且阻滞G2／M期；GLA能显著降低C6细胞的线粒体膜电位，促进细胞色素C从线粒体到胞浆的释放，降低Bcl-2表达，激活Caspase3，并切割PARP执行凋亡；SILAC蛋白组学实验发现GLA可导致C6细胞262个蛋白表达上调，581个蛋白表达下调。与细胞周期相关的蛋白发生下调的有16个，上调的有12个；与细胞凋亡相关的蛋白发

6、生下调的有13个，上调的有7个，其中GEF—H1上调最为显著；沉默GEF—H1后能够缓解GLA诱导的细胞凋亡。GLA可引起MAPK家族蛋白磷酸化并呈剂量依赖性，预处理ERK抑制剂U0126能够部分阻断GLA诱导的Caspase3的激活和PARP的剪切；2．GLA能够明显抑制肿瘤条件培养基或IL．10诱导的BV2小胶质细胞Argl，CDl63，IL-10，TGF．B，TNF．0【的mRNA水平表达是通过抑制NF．KB(p65)的激活。万方数据中文摘要蓝萼甲素对神经胶质瘤细胞抑制作用及其机制研究结论：1．GLA及其衍生物在体

7、外明显抑制神经胶质瘤细胞的增殖及诱导其凋亡，其基本活性结构为0L，p·不饱和酮二萜；2．GLA诱导神经胶质细胞凋亡是通过激活GEF．H1／RhoA／ERK途径；3．GLA抑制神经胶质瘤细胞上清或IL．10诱导的小胶质细胞M2转化是通过抑制NF—KB(p65)激活。关键词：蓝萼甲素；胶质瘤；凋亡；ERK；GEF—H1；小胶质细胞M2转化II作者：甘平指导教师：镇学初教授万方数据TheInhibitoryeffectandmechanismofGlaucocalyxinAongliomacellsAbstract0,bjec

8、five：ToobservetheeffectsandexplorethemechanismofglaucocalyxinA(GLA)on91iomacellapoptosisandmicroenvimnment．Methods：Cellproliferationandcellmigrationwereanalyze