蓝萼甲素对人肺癌a549细胞的抑制作用及其机制

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1、硕士学位论文论文题目蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制研究生姓名李梦姣指导教师姓名顾振纶教授蒋小岗副教授专业名称药理学研究方向肿瘤药理学论文提交日期2013年5月蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制中文摘要蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制中文摘要目的：探讨蓝萼甲素（GlaucocalyxinA,GLA）对人肺癌A549细胞的抑制作用及其作用机制，为GLA的抗肿瘤作用及用于临床提供进一步的实验依据。方法：以不同浓度的GLA干预体外培养人肺癌A549细胞,用MTT法观察其对A549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋

2、亡率及细胞周期变化;Hoechst33258染色观察给药后A549细胞核形态的变化，透射电镜（TEM）观察A549细胞超微结构的改变,扫描电镜(SEM)观察A549细胞表面结构改变;westernblot法检测GLA对caspase-3、8和PARP蛋白表达的改变。RT-PCR方法检测GLA对A549细胞内caspase-3、8和PARP基因表达的影响。实时定量(Realtime)PCR检测A549细胞内microRNA30a的表达情况。结果：GLA对体外培养A549细胞具有增殖抑制作用（P＜0.05，P＜0.01），并呈剂量和时间依赖趋势；Hoe

3、chst33258染色后，荧光显微镜下可见A549细胞胞核致密浓染;TEM观察可见A549细胞核皱缩、染色质边集等细胞凋亡的特征性改变；SEM观察可见A549细胞微绒毛减少，部分细胞膜表面出现一些大小不一的凹陷或孔洞。流式细胞仪PI单染结果显示不同浓度GLA作用A549细胞48h后，S期细胞比例增加（P＜0.05）；AnnexinⅤ-FITC双染结果显示不同浓度GLA作用于A549细胞48h后,细胞凋亡率逐渐增加（P＜0.01），3-甲基腺嘌呤(3-MA)与GLA联合应用可使细胞凋亡率增加（P＜0.05）；GLA干预A549细胞后Westernbl

4、ot检测结果:caspase3、caspase8、PARP蛋白表达上调，且均呈剂量依赖趋势；RT-PCR结果：caspase-3mRNA、caspase-8mRNA、PARPmRNA的表达上调（P＜0.05），RealtimePCR结果表明，microRNA30a表达下调（P＜0.05）。结论：蓝萼甲素(GLA)对体外培养人肺癌A549细胞的增殖具有一定的抑制作用,并可诱导细胞凋亡和自噬，且可使A549细胞阻滞在S期，其诱导细胞凋亡的I中文摘要蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制机制可能与激活caspase-8信号通路和下调microRN

5、A30a有关。关键词：GLA；肺癌；A549细胞；凋亡；自噬作者：李梦姣指导老师：顾振纶教授蒋小岗副教授IITheinhibitoryEffectofGlaucocalyxinAonhumanlungcancerA549cellanditsmechanismAbstractTheinhibitoryEffectofGlaucocalyxinAonhumanlungcancerA549cellanditsmechanismAbstractObjective：Toinvestigatetheantiprolifrativeeffectandthemec

6、hanismofGlaucocalyxinAonhumanlungcancerA549cells.Methods:HumanlungcarcinomaA549cellwastreatedwithdifferentconcentrationsofGLA（0,5,10,20µmol/L）,investigatethecytoxicityofGLAbyMTTassay.MorphologicalandbiochemicalchangesofapoptosiswereinvestigatedusingHoechst33258stainingandTEM.T

7、heratioofapoptoticcellswasmeasuredbyflowcytometryusingAnnexinV/PIstaining.ThechangeofcellcyclewasalsomeasuredbyflowcytometryusingPIstaining.25mg/kg).Westernblotingwasusedtodetecttheproteinlevelofcaspase-3、caspase-8andParp.RT-PCRtodetectthegenechangesofcaspase-3、caspase-8andPar

8、p.RealtimePCRtodetectthelevelofmicroRNA30A.Meanwhile,flowcyto