脂肪细胞摄取载脂蛋白a5的机制

《脂肪细胞摄取载脂蛋白a5的机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据中图分类号R575．1硕士学位论文学校代码!Q5三兰密级公珏脂肪细胞摄取载脂蛋白A5的机制Thmechanisms。apolipoproteinA5intemalizedemecotapollpoprotelninlnl1n1●adlpOCytes作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：谢羽飞临床医学内科学湘雅二医院赵水平教授论文答辩日期塑!生堇：!i答辩委员会主中南大学二0一四年五月万方数据学位论文原创性声明

2、JIIIIIIIIIIIIIIIIIIIY2687762本人郑重声明，所呈交的学

3、位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：日期：j业年上月4日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；

4、本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：日期：j啤年』月斗日导师签名日期：捌年』月j日万方数据硕士学位论文中文摘要摘要目的构建分化成熟的3T3一L1脂肪细胞肥大模型和胰岛素抵抗模型，用小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)技术沉默低密度脂蛋白受体相关蛋白1(10wdensitylipoproteinreceptor—relatedproteinl，L

5、RPl)，观察载脂蛋白A5(ApolipoproteinA5，ApoA5)的摄取情况，阐明脂肪细胞摄取apoA5的分子机制。方法将体外培养鼠源3T3一L1前体脂肪细胞诱导分化为成熟的3T3．L1脂肪细胞，分别进行以下实验：(1)建立肥大细胞模型：诱导分化成熟3T3一L1脂肪细胞后换液至第21天；(2)建立胰岛素抵抗细胞模型：用3ng／ml鼠TNF—a孵育成熟的3T3一L1脂肪细胞3天，每天换液；(3)重组人apoA5全长蛋白，并用125I标记，将重组人apoA5干预肥大和胰岛素抵抗的3T3．L1脂肪细胞模型，通过脉

6、冲追踪实验和WesternBlot检测肥大和胰岛素抵抗的3T3．LI成熟脂肪细胞摄取apoA5的量；(4)分别用不同浓度梯度lnM、5nM、20nM、50nMsiRNA沉默LRPl，通过WesternBlot检测LRPl沉默效率最佳的siRNA浓度；(5)用最佳siRNA浓度沉默LRP1后，将apoA5干预成熟3T3一L1成熟脂肪细胞，通过脉冲追踪实验和WesternBlot检测观察3T3一L1成熟脂肪细胞摄取apoA5的量。结果1、分化成熟的3T3一L1脂肪细胞换液至第21天，用油红0染色1T万方数据硕士学位论文

7、中文摘要可见鲜红色较大脂滴融合，建立肥大细胞模型。2、用3ng／ml鼠TNF．a孵育成熟的3T3一L1脂肪细胞3天，每天换液，建立胰岛素抵抗细胞模型。3、脉冲追踪实验结果显示：和正常3T3．L1脂肪细胞摄取apoA5相比，肥大和胰岛素抵抗的3T3．L1脂肪细胞使进入细胞内的12sI—apoA5分别减少66％并1136％(氏0．05)；此外，将apoA5干预肥犬和胰岛素抵抗3T3．L1脂肪细胞后进行WestemBlot检测，结果显示：和正常3T3．L1脂肪细胞摄取apoA5相比，肥大和胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞

8、摄取apoA5分别明显减少85％和52％(尸<0．05)。4、分别用不同浓度梯度lnM、5nM、20nM、50nMsiRNA沉默3T3，L1成熟脂肪细胞表面LRPl后，通过WesternBlot检测到沉默LRPl的最佳siRNA浓度是5nM(沉默效率约为87％)(P<0。05)。5、脉冲追踪实验显示：用终浓度为5nMsiRNA沉默3T3-L1成熟脂肪细胞LRPl后，可使进入细胞内的125I-apoA5含量降低了72％(P

9、熟脂肪细胞摄取apoA5的含量显著减少70％(p<0．05)。结论1、成功建立成熟3T3一L1肥大和胰岛素抵抗脂肪细胞模型。2、在肥大和胰岛素抵抗细胞模型中，3T3．L1脂肪细胞摄取apoA5明显减少。3、3T3一L1脂肪细胞主要是通过LRPl摄取apoA5。万方数据硕士学位论文中文摘要关键词载脂蛋白A5；3T3．L1脂肪细胞；小干扰RNA；低密度脂蛋白受体