内源性载脂蛋白o对脂肪细胞分泌功能的影响及机制初探

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1、万方数据中图分类号R589．2UDC610博士学位论文学校代码j堕堑内源性载脂蛋白。对脂肪细胞分泌功能的影响及机制初探Ef．fectofendogenousapolipoproteinooncytokinessecretioninadipocytesandthepossiblemechanisms●J●■●lnVeSnganon作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：吴陈璐临床医学内科学(心血管内科)湘雅二医院赵水平教授中南大学二O一四年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行

2、的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：融螃日期：2生年』月望日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本

3、学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：勒石吗、日期：生!望年上月望日日万方数据博士学位论文中文摘要内源性载脂蛋白0对脂肪细胞分泌功能的影响及机制初探摘要背景载脂蛋白O(印olipoproteinO，印oO)是2006年新发现的一种载脂蛋白，目前对其生理功能的认识知之甚少。生理情况下apoO的平均血浆浓度极低，仅为2．21士O．83p咖l。即使分泌型apoO主要存在于高密度脂蛋白(hi曲densitylipoprotein，}玎DL)中，但

4、印oO与如)L胆固醇水平及其他血脂成分并无相关性，且过表达印oO也不影响}玎)L的质量和功能，提示分泌到血浆中的印oO作用十分有限。除作为分泌型蛋白在细胞外发挥作用，印oO还可滞留于细胞内调节细胞代谢。急性冠脉综合征(acutecoron唧syndrome，ACS)患者apoO的血浆浓度明显升高，并且与炎症指标高敏C反应蛋白(hi曲一sensitiVityC—reactiVeprotein，hs—CI冲)水平呈显著正相关性，由此推测ap00可能与机体炎症状态有关。与此一致的是，采用小RNA干扰(smallinterferingRNA，

5、si鼢妊)技术沉默细胞内印00表达后，多种炎症相关基因的表达明显改变，但ap00是否在细胞内发挥调节炎症应答的作用及可能的调节途径均尚属未知。基于脂肪细胞可大量合成印00，而脂肪细胞炎症激活所致分泌功能异常在肥胖及动脉粥样硬化的发生、发展中具有重要作用，深入探讨内源性ap00对脂肪细胞分泌功能的影响，对揭示apoO的生理功能以及肥胖等相关疾病的发病机制具有重要意义。万方数据博士学位论文中文摘要目的探讨内源性apoO是否参与调控脂肪细胞炎症应答，以及印oO影响脂肪细胞分泌功能的可能作用机制。方法一．载脂蛋白O对人脂肪细胞分泌功能的影响由

6、行腹部外科手术的患者少许皮下脂肪组织中分离培养得人脂肪源间充质干细胞(adipose—derivedmesenchymalstemcells，ADSCs)，继而诱导分化为成熟的人脂肪细胞。采用流式细胞术及油红O染色法鉴定脂肪细胞。构建含人apoO．siRNA的慢病毒表达载体并包装好后，以低浓度氧化型低密度脂蛋白(oxidized10w．densi够lipoprotein，ox—LDL)(12．5pg／m1)分别干预正常人脂肪细胞或转染了印oO．siRNA慢病毒颗粒的脂肪细胞，采用real—timePCR检测apoO、白细胞介素一6(I

7、nterleukin一6，IL一6)、单核趋化蛋白一1(monoc”echemoa仕ractantprotein—l，MCP一1)、肿瘤坏死因子一0c(tumornecrosisfactor-0【，n师一0c)mRNA水平；westemblot法检测印oO蛋白表达；ELISA法检测细胞上清液炎性细胞因子IL．6、MCP一1、TNF一仅蛋白水平。二．载脂蛋白。调节脂肪细胞分泌功能的可能作用机制人ADSCs以促分化液促分化14天，或于促分化第4天行慢病毒转染沉默ap00表达并继续诱导分化成熟后，以低浓度ox—LDL(12．5pg／m1)分

8、别干预上述两种脂肪细胞，real一timePCR检测Toll样受体4(Toll—likereceptor4，TLR4)、髓样分化因子88(myeloiddifferentiation万方数据博士学位论文中文摘要prima