蓖麻磷脂酶c基因的克隆及其rnai表达载体的构建

《蓖麻磷脂酶c基因的克隆及其rnai表达载体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要蓖麻是内蒙地区非常具有区域特色的世界十大油料作物之一。蓖麻油由脂肪酸组成，主要成分是蓖麻油酸。磷脂酶C在控制蓖麻油酸生物合成过程中起关键性的作用，它催化2一油酰基卵磷脂形成卜酰基一2一油酰基甘油，使非羟基脂肪酸进入三酰基甘油。通过基因工程手段设计并构建含有磷脂酶C基因的RNAi表达载体，以期在植物体内转录出含有部分磷脂酶C基因发夹结构的dsRNA，发挥干扰磷脂酶C基因表达的作用，从而提高总蓖麻油含量。本试验以通蓖5号蓖麻为研究对象，提取其发育阶段的种子总RNA，逆转录成cDNA，通过降落PCR得到长度分别为803bp和45

2、8bp的磷脂酶C基因片段C1和C2，采用Sanger双脱氧链终止法对Cl和C2进行测序，测序结果与Genbank中蓖麻磷脂酶C基因的mRNA进行同源性分析，同源性分别达到99．88％和99．13％，成功克隆了蓖麻磷脂酶C基因。并采用一步法成功构建了蓖麻磷脂酶C基因的RNAi表达载体，为通过RNAi干扰技术获得总蓖麻油含量高的蓖麻新材料奠定了基础。关键词：蓖麻；磷脂酶C；RNAi；表达载体CloningofAPhospholipaseCandConstructionoftheRNAiExpresionVectorinCastor

3、AbstractCastorisoneofthetenleadingoilcropsintheworldandhasalsoregionalcharacteristicinInnerMongolia．Castoroiliscomposedoffattyacidanditsmainingredientisricinoleicacid．PhospholiDaseCplaysacriticalroleinricinoleicacidbiosynthesis，anditcatalyzes2一oleoyllecithintoform1-

4、acyl一2一oleoyl—sn—glycerol，whichistheprocessofnon—hydroxyfattyacidintotriacylglycer01．ThisresearchaimsatdesigningandbuildingRNAiexpressionvectorofphosphoiipaseCbygeneticengineeringtotranscriptahairpinstructureofdsRNA，interferephospholipaseCgeneexpressionandincreaseth

5、etotalcontentofCastor0ii．Wechosecastorastheresearchobject，andextractedtotalRNAofthedevelopingseed，thenmadeRNAreversedtranscriptionintocDNA．ByusingTD—PCR．Weobtainedtwogenefragmentsofphosph01ipaseC，thelengthsofwhichwere803bpand458bprespectively．WhensequencingC1andC2，w

6、eusedSangerdideoxy—mediatedchain—terminationmethod，Afteranalysingtheresultsof‘sequencingandthehomologywiththemRNAofphosph01ipaseCgenefromOenBank，wefoundthatthehomologyW&Supto99．88％and99．13％respectivelyandatlastwesucceededincloningthecastorphospholipaseCgene．Thenwesu

7、ccessfullybuiittheRNAiexpressionvectorofCastorphospholipaseCgene，andthiStechnologylaidafoundationforanewCastormaterial．Keywords：Castor,"PhospholipaseC：R^Ai：ExpressionVector目录摘要⋯．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．j⋯⋯⋯⋯⋯．IAbstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．II录⋯．．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、．．．．III1引言⋯．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯．．⋯．-．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯62．1植物材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯72．2菌种与载体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．72．3试剂⋯⋯