二烯丙基二硫下调dj-1抑制人白血病细胞hl-60增殖及诱导分化

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文二烯丙基二硫下调DJ-1抑制人白血病细胞HL-60增殖及诱导分化研究生姓名：王娟导师姓名、职称：谭晖副教授苏琦教授学科、专业名称：病理学与病理生理学研究方向：白血病防治的分子机制南华大学肿瘤研究所2012年5月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同

2、志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校

3、将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日万方数据目录一、中文摘要……………………………………………………1二．英文摘要……………………………………………………3三．正文1．前言…………………………………………………………52．材料与方法…………………………………………

4、………83．实验结果……………………………………………………164．讨论…………………………………………………………235．结论…………………………………………………………26四．参考文献……………………………………………………27五．附录…………………………………………………………32六．综述…………………………………………………………33七．撰写论文……………………………………………………………41八．致谢…………………………………………………………42万方数据二烯丙基二硫下调DJ-1抑制人白血病细胞HL-60增

5、殖及诱导分化研究生：王娟导师：谭晖副教授苏琦教授中文摘要目的:研究二烯丙基二硫（DADS）通过下调DJ-1对人白血病细胞系HL-60增殖抑制及诱导分化的影响，阐明DADS诱导人白血病细胞分化的分子机制，为肿瘤诱导分化治疗提供一个新思路。方法:通过细胞形态法观察细胞分化；RT-PCR、Westernblot、免疫细胞化学检测DADS对HL-60细胞DJ-1表达的影响；针对DJ-1mRNA序列设计合成siRNA转染人白血病细胞HL-60，RT-PCR鉴定选取干扰效果最好的1组转染HL-60细胞，故后续实验分组为对照组、干

6、扰组、脂质体组及阴性对照组；利用MTT法检测DADS对HL-60细胞的生长情况；硝基蓝四氮唑（NBT）还原反应鉴定细胞分化；RT-PCR、Westernblot检测基因沉默效果。结果:DADS可以诱导HL-60细胞向成熟粒细胞系样分化。RT-PCR、Westernblot显示，DADS呈时间依赖性抑制DJ-1的表达（P<0.05），免疫细胞化学显示未处理组细胞DJ-1蛋白表达呈强阳性，DADS处理后，DJ-1表达明显降低。MTT法检测细胞生长情况发现干扰组细胞生长减慢（P<0.05），脂质体组细胞、阴性对照组细胞与空

7、白对照组细胞生长差异无显著性意义。NBT结果显示，转染DJ-1-siRNA-HL-60细胞经DADS处理后NBT还原反应率增加，与未经DADS处理的细胞比较差异有显著性意义（P<0.05），且与阳性对照组ATRA处理后NBT还原反应率比较差异无显著性差异。将荧光标记DJ-1-siRNA转染HL-60细胞，RT-PCR筛选鉴定结果显示干扰组3的HL-60细胞中mRNA水平最低（P<0.01）。沉默DJ-1基因，RT-PCR、Westernblot结果显示转染了DJ-1-SiRNA的HL-601万方数据细胞与空白对照组人

8、HL-60细胞之间DJ-1的表达差异有显著性意义（P<0.05）；而脂质体组、空白对照组及阴性对照组间人HL-60细胞之间其表达的差异均无显著性意义。结论：1、DADS通过下调DJ-1抑制细胞增殖并诱导HL-60细胞分化；2、沉默DJ-1基因可以增强DADS对HL-60细胞的增殖抑制和诱导分化作用。关键词：白血病；DJ-1；诱导分化；基因沉默2